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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量pcr熔解曲线问题——质粒与样品的峰不在一条上
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Irus

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr熔解曲线问题——质粒与样品的峰不在一条上 已有1人参与

如图，检测结果发现样品的条带较宽
荧光定量pcr熔解曲线问题——质粒与样品的峰不在一条上
熔解曲线
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1楼 2013-11-30 15:33:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
14楼: Originally posted by Irus at 2013-12-06 08:24:21
那个是有一点模糊的二聚体，但是二聚体应该是出现一个单一峰的，而且和主条带之间有一定距离的，不会和主峰混成一个峰啊...

的确是你说的，引物二聚体的熔解温度通常比较低。确定是否是引物二聚体可以上一个无模板的反应，如果出现扩增，看看其熔解曲线的位置和形状。
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16楼2013-12-06 14:03:18
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yuxiangdan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-30 16:12:55
你扩增质粒上的序列不是你样品的基因吧？

[ 发自小木虫客户端 ]
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成功者永不放弃，放弃者永不成功。
2楼2013-11-30 15:36:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-02 16:08:21
Irus: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-19 18:47:54
说明产物不相同。核对一下序列差别和引物特异性。
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3楼2013-12-01 02:41:44
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Irus

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuxiangdan at 2013-11-30 15:36:55
你扩增质粒上的序列不是你样品的基因吧？

是一样的啊，质粒是用相同的DNA进行pcr之后胶回收在转化链接后培养然后用试剂盒提取的
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4楼2013-12-01 08:44:15
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