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crazymouse66

金虫 (正式写手)

应助: 12 (小学生)
金币: 3657.7
散金: 140
红花: 4
帖子: 551
在线: 112.6小时
虫号: 1441792
注册: 2011-10-14
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 请问做普通PCR要用多大浓度的DNA?

各位虫友好，我现在是提取了土壤的总DNA，然后想做个普通PCR。请问大家，一般做普通PCR的时候，DNA一般用多大的浓度呢？或者说在多大范围内的浓度比较好呢？谢谢大家。因为我提的DNA的量比较少，所以想把DNA浓度稀释一下再用，目前的DNA浓度大约在100-200ng/ul 吧，请问稀释后还能用吗？谢谢大家。

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1楼2013-11-28 09:56:10

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爆肝熊熊

铜虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 205.8
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在线: 5小时
虫号: 2830667
注册: 2013-11-27
性别: GG
专业: 群落生态学

1，做PCR的目的是什么？土壤类型不一样，能够提取的DNA的量也不一样，没法说浓度。
2，用什么primer？即使有时你的DNA模板的量很大，因为primer用的差别导致PCR产物量的差别较大。
3，一般来说在一个50ul的PCR反应系统中，10ng的DNA模板量是充足的。

所以这个完全没法做定论，只能给你建议，如果是50ul反应液中，建议先试试1uL的DNA模板量，根据电泳图像在酌情加减。