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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问做普通PCR要用多大浓度的DNA?
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crazymouse66

金虫 (正式写手)

[求助] 请问做普通PCR要用多大浓度的DNA?

各位虫友好，我现在是提取了土壤的总DNA， 然后想做个普通PCR。请问大家，一般做普通PCR的时候，DNA一般用多大的浓度呢？或者说在多大范围内的浓度比较好呢？谢谢大家。因为我提的DNA的量比较少，所以想把DNA浓度稀释一下再用，目前的DNA浓度大约在100-200ng/ul 吧，请问稀释后还能用吗？谢谢大家。
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1楼 2013-11-28 09:56:10
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爆肝熊熊

铜虫 (初入文坛)
1，做PCR的目的是什么？土壤类型不一样，能够提取的DNA的量也不一样，没法说浓度。
2，用什么primer？即使有时你的DNA模板的量很大，因为primer用的差别导致PCR产物量的差别较大。
3，一般来说在一个50ul的PCR反应系统中，10ng的DNA模板量是充足的。

所以这个完全没法做定论，只能给你建议，如果是50ul反应液中，建议先试试1uL的DNA模板量，根据电泳图像在酌情加减。
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12楼2013-11-28 17:41:16
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ningning915

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发贴积极交流。 2013-11-28 10:22:05
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊，谢谢大家的帮助，谢谢！ 2013-11-28 10:55:49
做pcr，模板浓度不用太高，过高还会出现拖带，你可以吸1ul，稀释50倍，做模板，应该差不多，我一般都是稀释50倍的。
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2楼2013-11-28 10:10:48
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crazymouse66

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ningning915 at 2013-11-28 10:10:48
做pcr，模板浓度不用太高，过高还会出现拖带，你可以吸1ul，稀释50倍，做模板，应该差不多，我一般都是稀释50倍的。

请问你的稀释50倍所用DNA的初始浓度大概是多少呢？
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3楼2013-11-28 10:24:20
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10-50ng/ul，30循环就足够了吧
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jiayoubashaonian
4楼2013-11-28 10:30:40
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