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maomaochongk

新虫 (初入文坛)

[求助] Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析,

做了一个小分子的电泳,海洋酵母的,marker还可以,不知道为什么样品,特点是小分子特别差,是不是盐分高了?方法是按照nature的方法做的,还是有别的原因,谢谢大家啊。。。。。
Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析,
未标题-1.jpg
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by linxt2005 at 2013-11-21 08:42:13
感觉也是制样的问题,建议充分变性试试看。另外上样前试着离心一下,取上清点样。还有电泳过程中注意低温。

应该是制样的问题,我又降低上样量跑了一下,分子量3.5k的marker跑了出来,但是10k以下的样品还是不清楚。
其中7是marker,最低分子量3.5;    1、4、8是乙醇沉淀后tris-cl溶解的,其他的是tris-cl研磨液。
为什么会出现这样的结果呢,谢谢了。。。。
Tricine-SDS-PAGE电泳结果分析,-1
2013.11.22.jpg

11楼2013-11-22 09:05:12
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牧炀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-20 10:32:20
你把分离胶的浓度往小了调...而且你这块胶凝的时间估计是短了就马上上样了。顺便做个梯度加样吧  样品量有点多
2楼2013-11-19 22:58:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-20 10:32:24
上样量太高,变性不充分。不清楚你的样品的buffer, 不过浓度过高的盐对普通SDS-PAGE也有很大影响。
3楼2013-11-20 04:14:54
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maomaochongk

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 牧炀 at 2013-11-19 22:58:14
你把分离胶的浓度往小了调...而且你这块胶凝的时间估计是短了就马上上样了。顺便做个梯度加样吧  样品量有点多

谢谢牧炀的意见。
分离胶的浓度具体调多少,根据你的经验,多谢
第一天制胶,第二天才上的样,胶的凝固应该可以
加样我减少一下吧
多谢啊。。。。。
4楼2013-11-20 15:18:54
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