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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 如何分开液相HPLC 的两个靠近的峰 求高人指点！ 有图
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pumame

新虫 (初入文坛)

[交流] 如何分开液相HPLC 的两个靠近的峰 求高人指点！ 有图 已有11人参与

样品核酸
柱子C18 Phenomenex (Luna C18 (2) 4.66 250 mm,

流动相： 98% 25 mM醋酸氨， 2% 乙腈
流速：1 ml/min

图中12.5分钟出峰的组分，我想收集起来。但是边上有个干扰峰。
我已经试过调pH,没有用。

如何改进条件，分开边上的干扰峰。
谢谢了。
如何分开液相HPLC 的两个靠近的峰 求高人指点！ 有图
未标题-1.jpg



[ Last edited by pumame on 2013-11-18 at 16:39 ]
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1楼 2013-11-18 16:35:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yjlrx

金虫 (小有名气)
★
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过载啦，稀释样品溶液或者减小进样量。
直接走梯度估计有点悬，98%的水相出峰有点早了，PH调高点再走梯度。
还有你的盐浓度是不是太高了点？
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4楼2013-11-18 21:36:15
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半阙满月

木虫 (小有名气)
我的建议是：1 减小进样量，2 降低流速和柱温3 梯度洗脱试试。祝楼主好运
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生命不息，奋斗不止
5楼2013-11-18 22:32:38
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wy1518

金虫 (正式写手)
★
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在后面走梯度试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-11-18 18:08:57
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)
★
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用SB-Aq 走 100% 25 mM醋酸氨试试
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3楼2013-11-18 19:03:49
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普通回帖

jh9689

木虫 (小有名气)
★
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从你的谱图上看柱子是严重超载的，包括溶剂峰也是这样，所以建议：1.减少进样量，如果只是分析的话建议峰高600-800mv；2为减少溶剂效应，可用组成最接近流动相的溶剂进行溶解，甚至是不含盐的流动相也可以。
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做分析的，大家多交流
6楼2013-11-19 20:36:16
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路过你的世界
，，

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2013-11-20 08:21:13
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yugijiang

木虫 (著名写手)
★
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收集，你是要做制备吗？你这样太耗时间了
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8楼2013-11-20 14:56:54
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xiawanhua

金虫 (小有名气)
★
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1.峰型比较难看，主峰与各干扰峰未达到有效分离，收集的时候有时间上的误差，不好收集。
2.一定要用醋酸铵作为流动相么？能不能换一个对基线无多大影响的体系？
3.柱子的选择上不是很好，换一根常用来分析核酸的柱子。
4.有机相只能用乙腈？还是尝试过换成甲醇？
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爱就轰轰烈烈的爱，不爱就不要说爱
9楼2013-11-20 17:29:01
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qwqw1212

木虫 (小有名气)
★
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其实很简单的，出峰时间的梯度洗脱时间加长就行
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热爱这份工作，希望能好好干下去
10楼2013-12-24 09:08:18
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