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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教～～～～如何测荧光强度？
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尼尔墨客

铜虫 (小有名气)

[交流] 求教～～～～如何测荧光强度？

最近用荧光显微镜观测组织中的自发荧光，看到文献里荧光强度是怎么测的？是用软件分析还是用仪器测吗？
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1楼 2013-11-14 22:20:37
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尼尔墨客

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-11-15 08:34:03
荧光显微照相，得照片，一般用软件分析IPP,imageJ等，可以适应各种情况。
也可以用荧光酶标仪直接测96孔板的细胞，但荧光不均一波动大。

别人也跟我说过IPP 但是有的时候显微照片选择的区域会有不同荧光强度也不一样 而且有的地方荧光比较强有的地方比较弱  那怎么选择 是多拍几张算平均值么
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4楼2013-11-15 21:22:47
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hl16010921

木虫 (正式写手)
★ ★
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尼尔墨客: 金币+1, 谢谢 我再考虑一下 2013-11-17 17:30:03
引用回帖:
9楼: Originally posted by 尼尔墨客 at 2013-11-16 23:46:40
我测的是植物组织里的绿色荧光，加了种荧光探针，目的是看在荧光变化，共聚焦最大倍数40的，这种情况一般算某一固定面积荧光强度么...

组织的情况复杂些，需要筛选计算荧光的细胞，因为可能组织是不同的多种细胞组成的，而有些细胞的荧光强度都有差异。能不能从细胞形态上区别出来？不怕麻烦的话可以将同种细胞（形态上划分）的圈出来统计看看。如果细胞分布均匀算固定面积荧光强度也可以。对于不同情况荧光强度的统计方法也有所区别。有的算等面积的平均强度，有的算阈值高于一定值得平均强度，有的算荧光的累积而不算平均。要选择合适的测量统计方法
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10楼2013-11-17 10:19:42
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hl16010921

木虫 (正式写手)
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尼尔墨客: 金币+5 2013-11-16 23:43:11
荧光显微照相，得照片，一般用软件分析IPP,imageJ等，可以适应各种情况。
也可以用荧光酶标仪直接测96孔板的细胞，但荧光不均一波动大。
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2楼2013-11-15 08:34:03
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)
软件
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5楼2013-11-16 00:36:32
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
顶，blessing, blessing, blessing ! ~~~
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6楼2013-11-16 06:44:52
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jinwei331

至尊木虫 (文坛精英)
…………………………
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7楼2013-11-16 08:06:12
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hl16010921

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 尼尔墨客 at 2013-11-15 21:22:47
别人也跟我说过IPP 但是有的时候显微照片选择的区域会有不同荧光强度也不一样 而且有的地方荧光比较强有的地方比较弱  那怎么选择 是多拍几张算平均值么...

要结合明场的照片具体分析。一种是CCD成像时中心和四周有差异，这在IPP中可以调节（见IPP的教程，手把手系列）但一般将四周剪切掉也基本可以。另一种是，细胞分布不匀，需要找到细胞分布匀称的视野，这是没办法的，只能一个视野一个视野找。另外为了去除杂光的影响，你可以适当调节统计荧光的强度范围，将信号过弱的背景杂光去除掉。只要对照组和实验组整张图片做同样的处理（所有参数均要一致）
要是用图片做结果本身就要平行做多个图片，作分析，统计，每张都要求荧光分布尽量一致。
在拍摄条件恒定的条件下，如果细胞分布均匀，不应出现忽强忽弱的信号呀。
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8楼2013-11-16 20:17:45
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尼尔墨客

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-11-16 20:17:45
要结合明场的照片具体分析。一种是CCD成像时中心和四周有差异，这在IPP中可以调节（见IPP的教程，手把手系列）但一般将四周剪切掉也基本可以。另一种是，细胞分布不匀，需要找到细胞分布匀称的视野，这是没办法的， ...

我测的是植物组织里的绿色荧光，加了种荧光探针，目的是看在荧光变化，共聚焦最大倍数40的，这种情况一般算某一固定面积荧光强度么
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9楼2013-11-16 23:46:40
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szdxxyj

新虫 (初入文坛)
CLSM
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11楼2018-07-13 16:58:54
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sjmr12213楼
2013-11-15 09:13   回复  
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