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尼尔墨客

铜虫 (小有名气)

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[交流] 求教～～～～如何测荧光强度？

最近用荧光显微镜观测组织中的自发荧光，看到文献里荧光强度是怎么测的？是用软件分析还是用仪器测吗？

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1楼 2013-11-14 22:20:37

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hl16010921

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

4楼: Originally posted by 尼尔墨客 at 2013-11-15 21:22:47
别人也跟我说过IPP 但是有的时候显微照片选择的区域会有不同荧光强度也不一样而且有的地方荧光比较强有的地方比较弱那怎么选择是多拍几张算平均值么...

要结合明场的照片具体分析。一种是CCD成像时中心和四周有差异，这在IPP中可以调节（见IPP的教程，手把手系列）但一般将四周剪切掉也基本可以。另一种是，细胞分布不匀，需要找到细胞分布匀称的视野，这是没办法的，只能一个视野一个视野找。另外为了去除杂光的影响，你可以适当调节统计荧光的强度范围，将信号过弱的背景杂光去除掉。只要对照组和实验组整张图片做同样的处理（所有参数均要一致）
要是用图片做结果本身就要平行做多个图片，作分析，统计，每张都要求荧光分布尽量一致。
在拍摄条件恒定的条件下，如果细胞分布均匀，不应出现忽强忽弱的信号呀。