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最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by pennchem at 2013-11-14 18:23:22
试试18度下,0.1mM IPTG 过夜表达

谢谢
学术狗
11楼2013-11-14 19:44:40
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傻傻的——

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-11-14 23:21:21
换个载体试试吧  可能会有改善
12楼2013-11-14 20:34:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 最美的平凡 at 2013-11-14 15:59:01
我试过几个条件,感觉表达量都不说很高的,纠结...

是表达量低还是形成包涵体了?如果是包涵体的话,减缓诱导速度(降低IPTG浓度,降低温度等)会有些帮助。
13楼2013-11-15 07:36:08
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最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-15 07:36:08
是表达量低还是形成包涵体了?如果是包涵体的话,减缓诱导速度(降低IPTG浓度,降低温度等)会有些帮助。...

应该是表达量低,因为超声破碎菌体之后,离心之后很少沉淀啊
学术狗
14楼2013-11-15 09:20:31
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phoenix211

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 最美的平凡 at 2013-11-14 15:58:04
我的N端有6个His...

Nde1切后还会有标签?
15楼2013-11-15 10:13:29
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wanghx_2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
表达量低,看是什么宿主,提高表达量不但是诱导剂(IPTG)的浓度,还有培养条件,添加IPTG的时间,不行还可以换诱导剂,或则增加质粒拷贝数等方法,你在看看

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

16楼2013-11-15 10:28:39
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最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by phoenix211 at 2013-11-15 10:13:29
Nde1切后还会有标签?...

是啊,his是在酶切位点之后的
学术狗
17楼2013-11-15 14:49:11
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最美的平凡

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by wanghx_2012 at 2013-11-15 10:28:39
表达量低,看是什么宿主,提高表达量不但是诱导剂(IPTG)的浓度,还有培养条件,添加IPTG的时间,不行还可以换诱导剂,或则增加质粒拷贝数等方法,你在看看

嗯,谢谢,不过,我还想问下,怎么增加质粒拷贝数啊?
学术狗
18楼2013-11-15 14:50:18
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wuyao0513

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-15 16:13:05
先高温诱导看看是不是能高效表达,确定可以高效表达后再做条件优化,还有你表达的蛋白是不是包涵体,我以前用的就是pet-30  结果表达基本全是包涵体。之后换成了pet-32的就可溶了!!
19楼2013-11-15 15:02:39
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最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by wuyao0513 at 2013-11-15 15:02:39
先高温诱导看看是不是能高效表达,确定可以高效表达后再做条件优化,还有你表达的蛋白是不是包涵体,我以前用的就是pet-30  结果表达基本全是包涵体。之后换成了pet-32的就可溶了!!

我今天已经在试37度诱导表达了,不过还是谢谢啦
学术狗
20楼2013-11-15 15:46:37
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