【答案】应助回帖

学术狗

11楼2013-11-14 19:44:40

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傻傻的——

新虫 (初入文坛)

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换个载体试试吧可能会有改善

12楼2013-11-14 20:34:02

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

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5楼: Originally posted by 最美的平凡 at 2013-11-14 15:59:01
我试过几个条件，感觉表达量都不说很高的，纠结...

是表达量低还是形成包涵体了？如果是包涵体的话，减缓诱导速度（降低IPTG浓度，降低温度等）会有些帮助。

13楼2013-11-15 07:36:08

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最美的平凡

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13楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-15 07:36:08
是表达量低还是形成包涵体了？如果是包涵体的话，减缓诱导速度（降低IPTG浓度，降低温度等）会有些帮助。...

应该是表达量低，因为超声破碎菌体之后，离心之后很少沉淀啊

学术狗

14楼2013-11-15 09:20:31

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phoenix211

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4楼: Originally posted by 最美的平凡 at 2013-11-14 15:58:04
我的N端有6个His...

Nde1切后还会有标签？

15楼2013-11-15 10:13:29

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wanghx_2012

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表达量低，看是什么宿主，提高表达量不但是诱导剂（IPTG）的浓度，还有培养条件，添加IPTG的时间，不行还可以换诱导剂，或则增加质粒拷贝数等方法，你在看看

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最美的平凡

16楼2013-11-15 10:28:39

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15楼: Originally posted by phoenix211 at 2013-11-15 10:13:29
Nde1切后还会有标签？...

是啊，his是在酶切位点之后的

学术狗

17楼2013-11-15 14:49:11

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最美的平凡

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16楼: Originally posted by wanghx_2012 at 2013-11-15 10:28:39
表达量低，看是什么宿主，提高表达量不但是诱导剂（IPTG）的浓度，还有培养条件，添加IPTG的时间，不行还可以换诱导剂，或则增加质粒拷贝数等方法，你在看看

嗯，谢谢，不过，我还想问下，怎么增加质粒拷贝数啊？

学术狗

18楼2013-11-15 14:50:18

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wuyao0513

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-15 16:13:05

先高温诱导看看是不是能高效表达，确定可以高效表达后再做条件优化，还有你表达的蛋白是不是包涵体，我以前用的就是pet-30 结果表达基本全是包涵体。之后换成了pet-32的就可溶了！！

19楼2013-11-15 15:02:39

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最美的平凡

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19楼: Originally posted by wuyao0513 at 2013-11-15 15:02:39
先高温诱导看看是不是能高效表达，确定可以高效表达后再做条件优化，还有你表达的蛋白是不是包涵体，我以前用的就是pet-30 结果表达基本全是包涵体。之后换成了pet-32的就可溶了！！

我今天已经在试37度诱导表达了，不过还是谢谢啦