24小时热门版块排行榜    

查看: 3438  |  回复: 32

最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by pennchem at 2013-11-14 18:23:22
试试18度下,0.1mM IPTG 过夜表达

谢谢
学术狗
11楼2013-11-14 19:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

傻傻的——

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-11-14 23:21:21
换个载体试试吧  可能会有改善
12楼2013-11-14 20:34:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 最美的平凡 at 2013-11-14 15:59:01
我试过几个条件,感觉表达量都不说很高的,纠结...

是表达量低还是形成包涵体了?如果是包涵体的话,减缓诱导速度(降低IPTG浓度,降低温度等)会有些帮助。
13楼2013-11-15 07:36:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-15 07:36:08
是表达量低还是形成包涵体了?如果是包涵体的话,减缓诱导速度(降低IPTG浓度,降低温度等)会有些帮助。...

应该是表达量低,因为超声破碎菌体之后,离心之后很少沉淀啊
学术狗
14楼2013-11-15 09:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoenix211

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 最美的平凡 at 2013-11-14 15:58:04
我的N端有6个His...

Nde1切后还会有标签?
15楼2013-11-15 10:13:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanghx_2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
表达量低,看是什么宿主,提高表达量不但是诱导剂(IPTG)的浓度,还有培养条件,添加IPTG的时间,不行还可以换诱导剂,或则增加质粒拷贝数等方法,你在看看

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

16楼2013-11-15 10:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by phoenix211 at 2013-11-15 10:13:29
Nde1切后还会有标签?...

是啊,his是在酶切位点之后的
学术狗
17楼2013-11-15 14:49:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最美的平凡

铁虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
16楼: Originally posted by wanghx_2012 at 2013-11-15 10:28:39
表达量低,看是什么宿主,提高表达量不但是诱导剂(IPTG)的浓度,还有培养条件,添加IPTG的时间,不行还可以换诱导剂,或则增加质粒拷贝数等方法,你在看看

嗯,谢谢,不过,我还想问下,怎么增加质粒拷贝数啊?
学术狗
18楼2013-11-15 14:50:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuyao0513

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-15 16:13:05
先高温诱导看看是不是能高效表达,确定可以高效表达后再做条件优化,还有你表达的蛋白是不是包涵体,我以前用的就是pet-30  结果表达基本全是包涵体。之后换成了pet-32的就可溶了!!
19楼2013-11-15 15:02:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
19楼: Originally posted by wuyao0513 at 2013-11-15 15:02:39
先高温诱导看看是不是能高效表达,确定可以高效表达后再做条件优化,还有你表达的蛋白是不是包涵体,我以前用的就是pet-30  结果表达基本全是包涵体。之后换成了pet-32的就可溶了!!

我今天已经在试37度诱导表达了,不过还是谢谢啦
学术狗
20楼2013-11-15 15:46:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 最美的平凡 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +12 enenenhui 2026-03-13 13/650 2026-03-16 08:30 by Linda Hu
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 0703求调剂 +7 jtyq001 2026-03-10 7/350 2026-03-14 01:06 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123! 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 08食品或轻工求调剂,本科发表3篇sci一区top论文,一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵, 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
信息提示
请填处理意见