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最美的平凡

铁虫 (正式写手)

[求助] 原核表达蛋白纯化 已有2人参与

我用的是pet-30a表达载体,Nde1和BamH1两个酶切位点,目的条带200多bp,我用iptg诱导,28摄氏度,结果表达量很低,求高手指点
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学术狗
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最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-15 07:36:08
是表达量低还是形成包涵体了?如果是包涵体的话,减缓诱导速度(降低IPTG浓度,降低温度等)会有些帮助。...

应该是表达量低,因为超声破碎菌体之后,离心之后很少沉淀啊
学术狗
14楼2013-11-15 09:20:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2013-11-14 18:35:22
如果你的问题是表达量低,先优化下诱导条件。优化后再考虑过柱纯化的问题。
2楼2013-11-14 13:26:07
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待您更多精彩。 2013-11-14 18:35:35
用pet-30a表达载体,Nde1和BamH1两个酶切位点,N端和C端都没有His-tag,只能用常规的离子交换、输水层析等方法分离。
3楼2013-11-14 13:55:45
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最美的平凡

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-11-14 13:55:45
用pet-30a表达载体,Nde1和BamH1两个酶切位点,N端和C端都没有His-tag,只能用常规的离子交换、输水层析等方法分离。

我的N端有6个His
学术狗
4楼2013-11-14 15:58:04
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