应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达蛋白纯化
52/1返回列表
查看: 3894  |  回复: 32
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

最美的平凡

铁虫 (正式写手)

[求助] 原核表达蛋白纯化 已有2人参与

我用的是pet-30a表达载体，Nde1和BamH1两个酶切位点，目的条带200多bp，我用iptg诱导，28摄氏度，结果表达量很低，求高手指点
回复此楼

» 猜你喜欢
学术狗
1楼 2013-11-14 11:13:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最美的平凡

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-15 07:36:08
是表达量低还是形成包涵体了？如果是包涵体的话，减缓诱导速度（降低IPTG浓度，降低温度等）会有些帮助。...

应该是表达量低，因为超声破碎菌体之后，离心之后很少沉淀啊
赞一下 回复此楼
学术狗
14楼2013-11-15 09:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2013-11-14 18:35:22
如果你的问题是表达量低，先优化下诱导条件。优化后再考虑过柱纯化的问题。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-11-14 13:26:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2013-11-14 18:35:35
用pet-30a表达载体，Nde1和BamH1两个酶切位点，N端和C端都没有His-tag，只能用常规的离子交换、输水层析等方法分离。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2013-11-14 13:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最美的平凡

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-11-14 13:55:45
用pet-30a表达载体，Nde1和BamH1两个酶切位点，N端和C端都没有His-tag，只能用常规的离子交换、输水层析等方法分离。

我的N端有6个His
赞一下 回复此楼
学术狗
4楼2013-11-14 15:58:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭