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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达蛋白纯化
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最美的平凡

铁虫 (正式写手)

[求助] 原核表达蛋白纯化 已有2人参与

我用的是pet-30a表达载体，Nde1和BamH1两个酶切位点，目的条带200多bp，我用iptg诱导，28摄氏度，结果表达量很低，求高手指点
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学术狗
1楼 2013-11-14 11:13:15
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wanghx_2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
表达量低，看是什么宿主，提高表达量不但是诱导剂（IPTG）的浓度，还有培养条件，添加IPTG的时间，不行还可以换诱导剂，或则增加质粒拷贝数等方法，你在看看
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

最美的平凡
16楼2013-11-15 10:28:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2013-11-14 18:35:22
如果你的问题是表达量低，先优化下诱导条件。优化后再考虑过柱纯化的问题。
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2楼2013-11-14 13:26:07
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2013-11-14 18:35:35
用pet-30a表达载体，Nde1和BamH1两个酶切位点，N端和C端都没有His-tag，只能用常规的离子交换、输水层析等方法分离。
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3楼2013-11-14 13:55:45
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最美的平凡

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-11-14 13:55:45
用pet-30a表达载体，Nde1和BamH1两个酶切位点，N端和C端都没有His-tag，只能用常规的离子交换、输水层析等方法分离。

我的N端有6个His
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学术狗
4楼2013-11-14 15:58:04
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