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smalltaocp

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 空针出峰

A:水-乙腈为4:1,B:水-乙腈-甲醇为1:3:1, 梯度: 0min A-B为75:25,23min A-B为30:70,40min A-B为30:70.前三针为空针,第四针为溶剂,第一针和第二针差不多,如图1;第三针出现一个峰,第四针溶剂也会出现,再进就都会出现;不同的机器,不同的柱子都会出现类似的情况,不知道为什么?求高手解惑。
空针出峰
空针1.PNG


空针出峰-1
空针3.PNG


空针出峰-2
溶剂.PNG
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linglingF8

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
smalltaocp(zhychen2008代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2013-11-14 17:02:24
smalltaocp: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-11-15 08:36:36
首先问一下是方法开发还是参考方法,如果是方法开发可以适当将梯度变缓,会缓解在固定位置出系统峰的情况,你的有机相最高时达到了55%,属于一般合理的梯度比例。其实方法开发注重杂质的分离,如果你的杂质都在主峰前出峰而后面只是留作安全观察,出这种<10mv的干扰峰不是什么重要的问题可以不去理会。如果是参考标准,如果你知道别人的不出峰,这种情况多数是水质问题,固体试剂或液体试剂问题。如果没有办法去除,只要证明对你的检测没有干扰,并能够通过空白进行扣除就可以。
作有责任的制药人
3楼2013-11-14 09:12:49
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smalltaocp

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by linglingF8 at 2013-11-14 11:42:08
考虑一下是水有问题,检测波长是多少?210的话,改个波长254不出峰,应该是小基团污染的,如果还出?那水可真的出问题了。也有可能你们用的试剂污染了,看看吧。一般你的梯度出峰的可能性比较小,哦还有是检测器脏 ...

改了254后,就不出了。
10楼2013-11-14 15:23:50
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shenyangxjl

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
smalltaocp: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-16 14:35:21
之前我们也有个项目出现这个问题,但是梯度峰原则上要求平缓,上面的异常峰不太能被接受,后来发现如果盐用水膜过滤之后再与有机相混合就好很多,你可以试试换个滤膜或者不过滤流动相试试,看是否是滤膜引入的,仅供参考,祝好

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

追求的脚步永不停歇
16楼2013-11-16 07:59:13
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普通回帖

喳喳的小巧

铁虫 (初入文坛)

我们也出现这样的问题了,但是不干扰检测,所以就这么做了
小仙女美洋洋
2楼2013-11-14 08:32:41
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smalltaocp

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by linglingF8 at 2013-11-14 09:12:49
首先问一下是方法开发还是参考方法,如果是方法开发可以适当将梯度变缓,会缓解在固定位置出系统峰的情况,你的有机相最高时达到了55%,属于一般合理的梯度比例。其实方法开发注重杂质的分离,如果你的杂质都在主峰 ...

参考方法,而且之前都没有这种状况,最近才出现的。
4楼2013-11-14 09:17:50
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linglingF8

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by smalltaocp at 2013-11-14 09:17:50
参考方法,而且之前都没有这种状况,最近才出现的。...

考虑一下是水有问题,检测波长是多少?210的话,改个波长254不出峰,应该是小基团污染的,如果还出?那水可真的出问题了。也有可能你们用的试剂污染了,看看吧。一般你的梯度出峰的可能性比较小,哦还有是检测器脏了,你的样品检了有几个月了,刚出现的问题,那和检测器关系不大。研发的话一般不关注,生产的话是要注意一下,不好解释。
作有责任的制药人
5楼2013-11-14 11:42:08
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
smalltaocp(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2013-11-14 17:02:43
smalltaocp: 金币+1, 有帮助 2013-11-15 08:36:48
流动相不干净,有机相和水相可能不是很干净
悲催的研发!
6楼2013-11-14 13:59:09
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yi_wang

铁杆木虫 (著名写手)

roye

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
smalltaocp(zhychen2008代发): 金币+1, 多谢回帖交流 2013-11-14 17:02:54
smalltaocp: 金币+1, 有帮助 2013-11-15 08:36:57
考虑到乙腈和甲醇一般买的都不会很差,估计是水的问题,用的不是很好的去离子水,一般纯化水可能不满足HPLC的要求。
哥泡的不是论坛,是寂寞....
7楼2013-11-14 14:08:03
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smalltaocp

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by linglingF8 at 2013-11-14 11:42:08
考虑一下是水有问题,检测波长是多少?210的话,改个波长254不出峰,应该是小基团污染的,如果还出?那水可真的出问题了。也有可能你们用的试剂污染了,看看吧。一般你的梯度出峰的可能性比较小,哦还有是检测器脏 ...

波长是230,水用过2种,一种是娃哈哈的,出峰就是上面那个图;改用屈臣氏的蒸馏水后会变成2个峰,其他的甲醇,乙腈也换过默克的,都是前两针没什么问题,后面再进就会出峰。
8楼2013-11-14 14:34:25
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smalltaocp

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by e_liang369 at 2013-11-14 13:59:09
流动相不干净,有机相和水相可能不是很干净

不是一次两次的问题了,配过N多次,都会出。
9楼2013-11-14 14:37:30
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