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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gc1027

银虫 (小有名气)

[求助] 聚苯乙烯微球血浆中吸附蛋白检测方法的问题

各位前辈,我最近在做PS微球从血浆中吸附纤维蛋白原(FIB)的试验,我首先采用的方法是检测PS微球吸附前后血浆中FIB的含量,通过吸附前减去吸附后来得到PS微球表面吸附的FIB量,但发现吸附前后血浆中FIB的量变化不大,无显著性差异(采用的是ELISA 试剂盒),所以差值法是行不通的。所以我现在想直接检测PS微球表面的FIB吸附量。
我想用试剂将PS微球表面上的血浆蛋白洗脱下来,再用ELISA进行检测FIB,请问我该选用什么试剂?什么试剂既能有效洗脱蛋白,又能不影响ELISA的试验?SDS肯定不行的。吐温20常被用于ELISA检测这里能不能用于洗脱蛋白?听说尿素也能洗脱蛋白,这里可以用吗?一般浓度多少?能提供相关文献最好,谢谢!
还有没有更好的办法,条件有限,只有一台小酶标仪,所以同位素标记法,荧光标记法,SPR,QCM等方法都不可以使用。
给大家出难题了,小弟不胜感激。
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duruo

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孩儿她爹

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gc1027: 金币+6, 有帮助 2013-11-13 13:34:22
一般PS球上洗脱的蛋白都会变性,这对于你用elisa进行测试是十分不利的
感觉你还是应该测上清液,几点改进意见:
1、PS球的量大一点,fib的其实浓度低一点;
2、Elisa实验是有测试饱和度的,测定时将fib稀释下再测
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
2楼2013-11-13 11:54:50
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gc1027

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by duruo at 2013-11-13 11:54:50
一般PS球上洗脱的蛋白都会变性,这对于你用elisa进行测试是十分不利的
感觉你还是应该测上清液,几点改进意见:
1、PS球的量大一点,fib的其实浓度低一点;
2、Elisa实验是有测试饱和度的,测定时将fib稀释下再测

因为要测纯血浆中的fib吸附,所以无法通过稀释血浆来降低fib的浓度,目前我已经将微球量增加了,但效果不明显,不知道还有没有更好的改进,谢谢。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-11-13 13:41:08
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feiliulei

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gc1027 at 2013-11-13 13:41:08
因为要测纯血浆中的fib吸附,所以无法通过稀释血浆来降低fib的浓度,目前我已经将微球量增加了,但效果不明显,不知道还有没有更好的改进,谢谢。
...

一定要稀释的,同学。相信我。测前后最大稀释倍数。最好将吸光度稀释至1.0以下。线性关系就好一些了,快感谢我吧。你的试验结果都是2.0以上的吸光度吧,哈哈

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2013-11-15 23:22:09
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