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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 高分子生物材料 » 聚苯乙烯微球血浆中吸附蛋白检测方法的问题
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gc1027

银虫 (小有名气)

[求助] 聚苯乙烯微球血浆中吸附蛋白检测方法的问题

各位前辈，我最近在做PS微球从血浆中吸附纤维蛋白原（FIB）的试验，我首先采用的方法是检测PS微球吸附前后血浆中FIB的含量，通过吸附前减去吸附后来得到PS微球表面吸附的FIB量，但发现吸附前后血浆中FIB的量变化不大，无显著性差异（采用的是ELISA 试剂盒），所以差值法是行不通的。所以我现在想直接检测PS微球表面的FIB吸附量。
我想用试剂将PS微球表面上的血浆蛋白洗脱下来，再用ELISA进行检测FIB，请问我该选用什么试剂？什么试剂既能有效洗脱蛋白，又能不影响ELISA的试验？SDS肯定不行的。吐温20常被用于ELISA检测这里能不能用于洗脱蛋白？听说尿素也能洗脱蛋白，这里可以用吗？一般浓度多少？能提供相关文献最好，谢谢！
还有没有更好的办法，条件有限，只有一台小酶标仪，所以同位素标记法，荧光标记法，SPR，QCM等方法都不可以使用。
给大家出难题了，小弟不胜感激。
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1楼 2013-11-12 23:20:30
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duruo

荣誉版主 (文坛精英)

孩儿她爹

优秀超版优秀版主优秀区长

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gc1027: 金币+6, ★有帮助 2013-11-13 13:34:22
一般PS球上洗脱的蛋白都会变性，这对于你用elisa进行测试是十分不利的
感觉你还是应该测上清液，几点改进意见：
1、PS球的量大一点，fib的其实浓度低一点；
2、Elisa实验是有测试饱和度的，测定时将fib稀释下再测
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能攻心则反侧自消，从古知兵非好战；不审势即宽严皆误，后来治蜀要深思
2楼2013-11-13 11:54:50
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gc1027

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by duruo at 2013-11-13 11:54:50
一般PS球上洗脱的蛋白都会变性，这对于你用elisa进行测试是十分不利的
感觉你还是应该测上清液，几点改进意见：
1、PS球的量大一点，fib的其实浓度低一点；
2、Elisa实验是有测试饱和度的，测定时将fib稀释下再测

因为要测纯血浆中的fib吸附，所以无法通过稀释血浆来降低fib的浓度，目前我已经将微球量增加了，但效果不明显，不知道还有没有更好的改进，谢谢。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-11-13 13:41:08
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feiliulei

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gc1027 at 2013-11-13 13:41:08
因为要测纯血浆中的fib吸附，所以无法通过稀释血浆来降低fib的浓度，目前我已经将微球量增加了，但效果不明显，不知道还有没有更好的改进，谢谢。
...

一定要稀释的，同学。相信我。测前后最大稀释倍数。最好将吸光度稀释至1.0以下。线性关系就好一些了，快感谢我吧。你的试验结果都是2.0以上的吸光度吧，哈哈

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2013-11-15 23:22:09
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