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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC 流动相比例差别较大，但出峰的保留时间却不变，是怎么回事？
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YOUNG11

新虫 (小有名气)

[求助] HPLC 流动相比例差别较大，但出峰的保留时间却不变，是怎么回事？

在做HPLC 时遇到一个非常棘手的问题：改变流动相醇水的比例，当甲醇比例分别为20%，40%，60%，80%时，保留时间基本一致，都在2.85min左右出峰，我想让我的化合物在10分钟左右出峰该怎么做？以前从来没有出现过这种情况，还请高手帮忙解决一下，非常感谢。
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1楼 2013-11-12 22:51:34
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YOUNG11

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by swallow13 at 2013-11-14 11:09:52
DMSO用C18柱基本是没有保留的 我做多肽的时候会用到 10%的甲醇基本就洗脱了 lz应该做的是降低有机相比例 比如起始用100%的水

我做的不是多肽，就是普通的小分子，溶在含有0.1%的DMSO的PBS缓冲液中，C18柱可以用100%的水冲吗？压力会不会太大？没有保留是什么意思？是直接被冲出来，没有出峰吗？
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12楼2013-11-14 11:21:43
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 辛苦了 2013-11-13 01:55:47
YOUNG11: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-13 14:24:49
如此大比例改变甲醇浓度都没有改变保留时间，有可能你的2.85min是死时间，如果不是的话，检查比例阀或者电磁阀。
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2楼2013-11-12 23:00:35
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hexued6933

版主 (著名写手)

日出东方，岂能不败

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 谢谢积极参与交流 2013-11-13 01:56:14
YOUNG11: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-13 14:30:50
支持二楼回答。三分钟之内可能是死体积区域。这种情况一般继续减少有机相比例或者降低流速。同时要看看化合物性质，选择合适的色谱体系。比如，物质是酸性的，应该选择酸性流动相，抑制电离，如果碱性过强可以考虑离子对体系。具体情况还得看化合物的性质和你目前的具体条件

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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大家好，才是真的好
3楼2013-11-13 00:05:11
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tianxia119wo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
YOUNG11: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-13 14:31:30
首先你要确定3min这个峰是你要的主峰,可以从进样量,样品浓度入手,成倍增大或缩小,看峰面积变化.
很有可能你的样品出峰时间太晚吧,或者在这个体系不出峰...需要调整流动相,添加缓冲盐改善出峰时间.
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浙大化学系本科生,希望能和各位虫友多多交流,互相帮助.
4楼2013-11-13 06:43:13
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