应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】新手想在目标蛋白后加Flag tag方法请教
51/1返回列表
查看: 4276  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Hairlessape

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】新手想在目标蛋白后加Flag tag方法请教

实验室有质粒带有目标蛋白，但不带TAG，现在想在蛋白后加flag以用于后期蛋白质提取、纯化。在网上一时没搜寻到资料，故在此发帖。如何从何做起呢，方法有哪些，有经验的虫友请不吝赐教！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-12 17:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Hairlessape at 2013-11-12 20:27:55
谢谢回复，我们确实是由酶切位点的，第一种方法我在考虑，等师兄把质粒序列给我就设计引物开始；第二种重组的方式我倒一点都不了解，也没做过。另外我师兄之前讲过另一种方式（不知他有没有try过~~）是直接把FLAG核 ...

看你的质粒多大了，即使扩增出来，一方面可能引入突变，一方面也还要连接转化
赞一下 回复此楼
7楼2013-11-19 11:21:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
追尾的事不安全啊
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-12 17:06:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, MolEPI+1, 鼓励发帖交流！ 2013-11-12 17:57:44
如果已有的质粒上的目的序列是酶切连上去的，那就
1. 酶切，留载体框架
2.用质粒做模板，pcr目的序列，反向引物上加上flag核酸序列（顺序别反了），回收pcr产物，酶切
3.连接，1+2即可

如果是重组方式构建的，
1.需要原始不带目的序列的载体
2.用质粒做模板，pcr目的序列，反向引物上加上flag核酸序列（顺序别反了）还有重组位点序列，回收pcr产物
3.重组，1+2
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-12 17:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hairlessape

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jasco at 2013-11-12 17:14:30
如果已有的质粒上的目的序列是酶切连上去的，那就
1. 酶切，留载体框架
2.用质粒做模板，pcr目的序列，反向引物上加上flag核酸序列（顺序别反了），回收pcr产物，酶切
3.连接，1+2即可

如果是重组方式构建的， ...

谢谢回复，我们确实是由酶切位点的，第一种方法我在考虑，等师兄把质粒序列给我就设计引物开始；第二种重组的方式我倒一点都不了解，也没做过。另外我师兄之前讲过另一种方式（不知他有没有try过~~）是直接把FLAG核酸序列放在引物中间，直接对质粒扩增，这样能得到全长的新质粒么？
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-12 20:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 3/150 2026-11-09 14:58 by 天下第一剑
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-09 13:26 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭