应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】新手想在目标蛋白后加Flag tag方法请教
71/1返回列表
查看: 4156  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

Hairlessape

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】新手想在目标蛋白后加Flag tag方法请教

实验室有质粒带有目标蛋白，但不带TAG，现在想在蛋白后加flag以用于后期蛋白质提取、纯化。在网上一时没搜寻到资料，故在此发帖。如何从何做起呢，方法有哪些，有经验的虫友请不吝赐教！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-12 17:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

jasco

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, MolEPI+1, 鼓励发帖交流！ 2013-11-12 17:57:44
如果已有的质粒上的目的序列是酶切连上去的，那就
1. 酶切，留载体框架
2.用质粒做模板，pcr目的序列，反向引物上加上flag核酸序列（顺序别反了），回收pcr产物，酶切
3.连接，1+2即可

如果是重组方式构建的，
1.需要原始不带目的序列的载体
2.用质粒做模板，pcr目的序列，反向引物上加上flag核酸序列（顺序别反了）还有重组位点序列，回收pcr产物
3.重组，1+2
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-12 17:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
追尾的事不安全啊
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-12 17:06:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hairlessape

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jasco at 2013-11-12 17:14:30
如果已有的质粒上的目的序列是酶切连上去的，那就
1. 酶切，留载体框架
2.用质粒做模板，pcr目的序列，反向引物上加上flag核酸序列（顺序别反了），回收pcr产物，酶切
3.连接，1+2即可

如果是重组方式构建的， ...

谢谢回复，我们确实是由酶切位点的，第一种方法我在考虑，等师兄把质粒序列给我就设计引物开始；第二种重组的方式我倒一点都不了解，也没做过。另外我师兄之前讲过另一种方式（不知他有没有try过~~）是直接把FLAG核酸序列放在引物中间，直接对质粒扩增，这样能得到全长的新质粒么？
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-12 20:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hairlessape

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-11-12 17:06:57
追尾的事不安全啊

谢谢回复，不过此话何解，不懂，介意详述么？
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-12 20:29:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Hairlessape at 2013-11-12 20:29:42
谢谢回复，不过此话何解，不懂，介意详述么？...

你想从dna还是rna都能够提取出来  做pcr
现在还有直接从组织做rt-pcr的，裂解液都不要加，而且还不贵
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-14 08:58:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Hairlessape at 2013-11-12 20:27:55
谢谢回复，我们确实是由酶切位点的，第一种方法我在考虑，等师兄把质粒序列给我就设计引物开始；第二种重组的方式我倒一点都不了解，也没做过。另外我师兄之前讲过另一种方式（不知他有没有try过~~）是直接把FLAG核 ...

看你的质粒多大了，即使扩增出来，一方面可能引入突变，一方面也还要连接转化
赞一下 回复此楼
7楼2013-11-19 11:21:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Hairlessape 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖？ +4 CrisMessi 2026-08-18 4/200 2026-08-19 00:53 by gatelove
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭