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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

[求助] Southren杂交 酶切、探针的设计

请教各位高手:
敲掉了一个基因,接下来要做个Southren杂交检测,不知道探针是怎么设计的?是在野生型上设计还是在突变体上设计呢?如果在野生型上设计是设计在被敲掉的部分吗?还是设计在野生型的同源臂上呢?
另外,酶切有什么要求呢?
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

楼主是想检测突变体中的插入拷贝数,还是想确定一下突变体中该基因丢失?
jiayoubashaonian
2楼2013-11-12 16:05:54
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2013-11-12 16:05:54
楼主是想检测突变体中的插入拷贝数,还是想确定一下突变体中该基因丢失?

已经确定是单拷贝,只是确定突变体中该基因的丢失
3楼2013-11-13 08:49:03
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

是在野生型上被敲掉的部分设计吧
jiayoubashaonian
4楼2013-11-13 08:52:49
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huahu3600

新虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-14 10:24:43
探针设计在同源臂外,根据条带大小来判定野生型还是重组型。
但是,要选择合适的内切酶,也就是说你选择的酶,野生型与重组型会有不同的条带产生。
这样,能证明同源重组,进而排除掉随机插入的情况。
5楼2013-11-13 12:25:28
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-13 12:25:28
探针设计在同源臂外,根据条带大小来判定野生型还是重组型。
但是,要选择合适的内切酶,也就是说你选择的酶,野生型与重组型会有不同的条带产生。
这样,能证明同源重组,进而排除掉随机插入的情况。

谢谢你的回答。。。
6楼2013-11-14 08:18:25
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