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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Southren杂交 酶切、探针的设计
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)

[求助] Southren杂交 酶切、探针的设计

请教各位高手：
敲掉了一个基因，接下来要做个Southren杂交检测，不知道探针是怎么设计的？是在野生型上设计还是在突变体上设计呢？如果在野生型上设计是设计在被敲掉的部分吗？还是设计在野生型的同源臂上呢？
另外，酶切有什么要求呢？
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1楼 2013-11-12 15:07:41
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
楼主是想检测突变体中的插入拷贝数，还是想确定一下突变体中该基因丢失？
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jiayoubashaonian
2楼2013-11-12 16:05:54
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2013-11-12 16:05:54
楼主是想检测突变体中的插入拷贝数，还是想确定一下突变体中该基因丢失？

已经确定是单拷贝，只是确定突变体中该基因的丢失
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3楼2013-11-13 08:49:03
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
是在野生型上被敲掉的部分设计吧
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jiayoubashaonian
4楼2013-11-13 08:52:49
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huahu3600

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-14 10:24:43
探针设计在同源臂外，根据条带大小来判定野生型还是重组型。
但是，要选择合适的内切酶，也就是说你选择的酶，野生型与重组型会有不同的条带产生。
这样，能证明同源重组，进而排除掉随机插入的情况。
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5楼2013-11-13 12:25:28
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guaiyaya

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-11-13 12:25:28
探针设计在同源臂外，根据条带大小来判定野生型还是重组型。
但是，要选择合适的内切酶，也就是说你选择的酶，野生型与重组型会有不同的条带产生。
这样，能证明同源重组，进而排除掉随机插入的情况。

谢谢你的回答。。。
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6楼2013-11-14 08:18:25
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