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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DGGE切胶条带PCR产物弥散
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lhf903

金虫 (正式写手)

[求助] DGGE切胶条带PCR产物弥散

DGGE后切胶，30ul无菌水浸泡过夜，以2ul为模板，25ul体系PCR，程序不变，产物弥散，且没有目标条带~
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1楼 2013-11-11 12:59:17
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白蜓er

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by lhf903 at 2015-04-20 21:24:47
具体说说吧，我看能不能帮忙~...

恩恩，就是我在DGGE切胶回收之后进行PCR扩增，怎么都P不出来，在琼脂糖电泳里看泳道上都是弥散开的，没有目的DNA片段，而且空白对照都是弥散的，都不知道是怎么原因。以为是扩增程序、或者Mix、引物的问题，但是做阳性对照都有目的片段。以为是DNA模板问题，就又重新做了一次，切胶，然后加入25uL的elution buffer,65度煮半小时，然后放在4度过夜，离心分装，还是不行，，，都想不通是哪里出问题了。。楼主，求指点呀。。
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12楼2015-04-21 10:01:22
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heijiwang

铜虫 (初入文坛)
我想知道 怎么切胶，太薄了````
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2楼2013-11-11 14:35:52
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lhf903: 金币+20, ★有帮助 2013-11-14 12:02:44
我们都是用1 TE泡4摄氏度过夜的，要不你试试
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3楼2013-11-11 15:01:56
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Hazel张健

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主上图来看下。
交流下~~楼主做的是细菌V3区吗？我也是出现产物弥散的现象，是局部小范围弥散，而且感觉还有稍大点的非特异产物。DGGE前含GC夹板以及DGGE后不含GC夹板都是扩增成那样。图一。
我用的是降落PCR，提高退火温度的范围试过，还是这个模样。
酶用的是TaKaRa 的高保真的EX-Taq。
DGGE切胶条带PCR产物弥散
图一.jpg
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4楼2013-11-11 17:10:22
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