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chrisluxal

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[求助] 两短片段连接并插入EGFP载体的解决方法

最近准备将两个段片段 A:150bp B:24bp 连接起来，再接入EGFP载体，进行下一步工作，现在遇到的问题是如何才能精确地不要多余碱基的情况下获得这两个片段，使其能够正常的转录和翻译？
望各位不吝赐教！

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人生来自由

1楼 2013-11-07 23:41:44

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chrisluxal

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引用回帖:

8楼: Originally posted by gyesang at 2013-11-08 10:39:20
不是直接作为引物，而是把这24bp设计在针对150bp引物的5‘端，具体的你再看看...

我的意思是把这24bp直接作为引物的一部分另外连接目的片段的一部分对吧？我试了一下我的引物结构是这样的：保护碱基+酶切位点+24bp+15bp目的基因片段，我试了只有连接15bp才能够扩出目的片段，短了就不行了，这样的话我的引物直接就有39bp了，而且还有二级结构，感觉问题不太好解决。这要怎么看么？非常感谢！