24小时热门版块排行榜    

查看: 2172  |  回复: 22
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chrisluxal

新虫 (小有名气)

[求助] 两短片段连接并插入EGFP载体的解决方法

最近准备将两个段片段 A:150bp B:24bp 连接起来,再接入EGFP载体,进行下一步工作,现在遇到的问题是如何才能精确地不要多余碱基的情况下获得这两个片段,使其能够正常的转录和翻译?
望各位不吝赐教!
回复此楼
人生来自由
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by chrisluxal at 2013-11-08 01:38:23
是直接用这24bp作为引物么?我先尝试一下!非常感谢!...

不是直接作为引物,而是把这24bp设计在针对150bp引物的5‘端,具体的你再看看
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2013-11-08 10:39:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

happy1985

金虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-08 01:16:44
用短片段并加入几个长片段的碱基作为一端引物,再以长片段的另一端为另一个引物,当然引物两端都要加上限制性酶切位点,然后pcr,纯化,酶切,连接,转化。
穿越黑暗必是阳光普照
2楼2013-11-07 23:48:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把24bp设计在引物里面,然后去PCR那个150bp的片段,再连接如EGFP载体,这样成功率会更高一些
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-11-08 01:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chrisluxal

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by happy1985 at 2013-11-07 23:48:30
用短片段并加入几个长片段的碱基作为一端引物,再以长片段的另一端为另一个引物,当然引物两端都要加上限制性酶切位点,然后pcr,纯化,酶切,连接,转化。

我先尝试一下把这24bp怎么放在引物设计里面!是直接用这24bp作为引物序列么?非常感谢!!
人生来自由
4楼2013-11-08 01:36:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕找调剂 +3 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:13 by peike
[考研] 0854 考研调剂 招生了!AI 方向 +4 pk3725069 2026-03-19 16/800 2026-03-23 23:09 by 汪!?!
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +3 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:47 by pswait
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:00 by macy2011
[考研] 306求调剂 +9 chuanzhu川烛 2026-03-18 9/450 2026-03-23 13:17 by luoyongfeng
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
信息提示
请填处理意见