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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
查看: 2009  |  回复: 22
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chrisluxal

新虫 (小有名气)

[求助] 两短片段连接并插入EGFP载体的解决方法

最近准备将两个段片段 A:150bp B:24bp 连接起来,再接入EGFP载体,进行下一步工作,现在遇到的问题是如何才能精确地不要多余碱基的情况下获得这两个片段,使其能够正常的转录和翻译?
望各位不吝赐教!
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人生来自由
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by chrisluxal at 2013-11-08 01:38:23
是直接用这24bp作为引物么?我先尝试一下!非常感谢!...

不是直接作为引物,而是把这24bp设计在针对150bp引物的5‘端,具体的你再看看
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2013-11-08 10:39:20
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happy1985

金虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-08 01:16:44
用短片段并加入几个长片段的碱基作为一端引物,再以长片段的另一端为另一个引物,当然引物两端都要加上限制性酶切位点,然后pcr,纯化,酶切,连接,转化。
穿越黑暗必是阳光普照
2楼2013-11-07 23:48:30
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gyesang

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把24bp设计在引物里面,然后去PCR那个150bp的片段,再连接如EGFP载体,这样成功率会更高一些
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-11-08 01:17:41
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chrisluxal

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by happy1985 at 2013-11-07 23:48:30
用短片段并加入几个长片段的碱基作为一端引物,再以长片段的另一端为另一个引物,当然引物两端都要加上限制性酶切位点,然后pcr,纯化,酶切,连接,转化。

我先尝试一下把这24bp怎么放在引物设计里面!是直接用这24bp作为引物序列么?非常感谢!!
人生来自由
4楼2013-11-08 01:36:44
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