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windleakey金虫 (小有名气)
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[求助]
最近做转化快疯掉了
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因为定量DNA的nano好像不好用了，所以只能通过肉眼看DNA浓度。 酶切胶回收后跑电泳，感觉浓度还可以，可是连接转化后，就是不长菌落！ PCR产物连T载体成功，说明连接酶没问题。用对照质粒转化成功，说明转化没问题。难道是酶切这步有什么问题吗？ 做了好多次都失败了，要崩溃了，求大神帮助啊，给些指点。 |
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sun_in_night
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那你可以缩短一下时间，但我觉得这不是主要问题，3小时不长。 你再反复确认一下你的PCR产物的酶切位点和质粒上的是否一样。再者你可以拿个其他的已经连上的gene的载体用相同的酶切一下，然后连到你要的载体上。这样你就可以确认是不是你的酶切、连接体系有问题了。如果上面的可以，那很有可能是你的PCR产物的酶切出了问题。 |
windleakey15楼2013-11-10 11:53:07
2楼2013-11-07 22:52:42
windleakey
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琼脂糖电泳嘛，看亮度了，能给些建议不 3楼2013-11-07 22:58:10
天使托
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4楼2013-11-07 23:45:01
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