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windleakey金虫 (小有名气)
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[求助]
最近做转化快疯掉了
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因为定量DNA的nano好像不好用了，所以只能通过肉眼看DNA浓度。 酶切胶回收后跑电泳，感觉浓度还可以，可是连接转化后，就是不长菌落！ PCR产物连T载体成功，说明连接酶没问题。用对照质粒转化成功，说明转化没问题。难道是酶切这步有什么问题吗？ 做了好多次都失败了，要崩溃了，求大神帮助啊，给些指点。 |
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yujitianqing
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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有些是用快酶酶切的，所以时间很短，Takara、Fermentas都有生产快酶。若用普通Takara 限制酶的话，按照说明书是一个小时，当然可以延长，毕竟酶在运输过程中可能出现一些问题。后面你再看下选用的两种酶缓冲液是否合适或检查下会不会出现同步酶切效果差这方面的问题。 |
windleakey13楼2013-11-10 08:40:44
fuyuandj86
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2楼2013-11-07 22:52:42
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琼脂糖电泳嘛，看亮度了，能给些建议不 3楼2013-11-07 22:58:10
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4楼2013-11-07 23:45:01
