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PCR产物凝胶电泳图
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kehan777
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专业: 生物化学
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]
PCR产物凝胶电泳图
请问大家对这个图的PCR反应体系有什么建议吗?
拖带、有二聚体、目的条带不够亮..
其中一条:是该稍微减少模板量,还是增加?
3.png
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1楼
2013-10-30 09:35:52
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yesucao
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引用回帖:
6楼
:
Originally posted by
kehan777
at 2013-10-31 21:55:18
如果做PCR产物纯化,而不做胶回收,二聚体和拖带 会不会影响后面的双酶切?因为在双酶切之后,连接之前,我们会再做一次胶回收,但不知道上面所说的影响有多大.....
由图看出,其实PCR产物的量还是很少的,不亮,所以首要的问题解决PCR;DNA提取,引物、Tm值都是需要考虑的,前一步做好,后面都是白费力!
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11楼
2013-11-02 12:21:28
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yesucao
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2013-10-30 21:00:35
kehan777: 金币+5,
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很有帮助
2013-11-05 19:24:32
模板提取是不是不是很好啊?浓度低了,增加模板量试一下,反正到时候你切的是你的目的条带。
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2楼
2013-10-30 11:32:23
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wuyao0513
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2013-10-30 21:00:46
换引物吧,引物的影响很大的。。。好好的设计
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3楼
2013-10-30 11:38:52
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wanghx_2012
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2013-10-30 21:00:55
首先,你是菌落PCR还是提取的DNA。
如果是DNA,建议纯化后再PCR,如果还是不行就从新设计引物;如果是菌落PCR,建议用菌龄早的小菌落,添加适量的镁离子,再做一次,如果不行就换引物。
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4楼
2013-10-30 15:26:57
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