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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达小分子蛋白有什么技巧
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sweet561

银虫 (小有名气)

[交流] 表达小分子蛋白有什么技巧 已有11人参与

目前，正在用真核表达载体pPIC9K表达胰岛素基因，由于目的基因较小，蛋白分子量只有6.3KD，用SDS-PAGE电泳跑胶都比较弥散，看不出目的蛋白是否表达，希望各位能给予帮助，有什么好的方法，谢谢！
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1楼 2013-10-29 11:05:55
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
蛋白分子量太小，低于14KD应该使用Tricine-SDS-PAGE。

另外表达低分子量蛋白质时有时表达效果不好，可以把多个要表达的低分子量的小蛋白质融合在一起，彼此之间有酶切位点，并且C末端接上(His)6，这样表达时可以用镍柱纯化出融合蛋白质，同时检测融合蛋白质的表达效果，而后用酶切获得小分子蛋白质。
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13楼2013-11-06 12:30:47
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wuyao0513

新虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 00:04:58
可以调整胶的配制啊，选择更小的maker
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2楼2013-10-29 11:46:41
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shyh1983

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 00:04:53
对于10kd以下的蛋白的电泳检测，要想得到好的结果，最好使用Tricine-SDS-PAGE进行检测。
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3楼2013-10-29 16:35:47
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sweet561

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shyh1983 at 2013-10-29 16:35:47
对于10kd以下的蛋白的电泳检测，要想得到好的结果，最好使用Tricine-SDS-PAGE进行检测。

我也看到有文章用Tricine-SDS-PAGE进行检测，请问你用过此方法吗，能把具体的缓冲液及制胶方法说一下吗，谢谢！
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4楼2013-10-30 08:48:16
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