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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教dynabeads磁珠做IP的几个问题
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 求教dynabeads磁珠做IP的几个问题

1.按照说明的量混合抗体与磁珠，室温30 min，未做交联，与蛋白质样品孵育4℃过夜，IP未钓到目的蛋白，操作上有什么问题？

2.蛋白G磁珠的直径好像比琼脂糖珠小很多，是否可以用未剪口的枪头吹洗？
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shayin

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1楼 2013-10-24 14:45:18
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jurkat.1640: 金币+1, ★有帮助 2013-10-25 12:18:45
137167741: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-27 21:06:04
会不会目标蛋白的标识部分被包裹在内部?
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2楼2013-10-24 22:51:22
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-10-24 22:51:22
会不会目标蛋白的标识部分被包裹在内部?

这个是另外一个问题，我主要关心的是操作上有没有问题，因为没做个磁珠的CoIP实验，也没人教
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3楼2013-10-25 12:18:19
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一步一步

木虫 (著名写手)
★ ★
137167741: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-27 21:06:22
不是很懂CoIP，但是接触过用磁珠做IP实验。所以在此有几个问题：
1. 你的磁珠和抗体为什么不交联？
2. 加磁珠的目的不就是让目的蛋白结合到抗体上，利用磁力作用去杂。不与磁珠交联，即使抗体与蛋白结合也不能与杂质蛋白区别，加磁珠还有什么用？
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4楼2013-10-27 09:51:53
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-10-27 09:51:53
不是很懂CoIP，但是接触过用磁珠做IP实验。所以在此有几个问题：
1. 你的磁珠和抗体为什么不交联？
2. 加磁珠的目的不就是让目的蛋白结合到抗体上，利用磁力作用去杂。不与磁珠交联，即使抗体与蛋白结合也不能与杂 ...

说明书上说交联是选做项，而且交联有点麻烦所以没做。
蛋白G琼脂糖珠与抗体抗原孵育时是没有交联步骤。
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5楼2013-10-27 18:03:38
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springs954

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
jurkat.1640: 金币+2, ★有帮助 2013-11-14 09:39:19
jurkat.1640: 金币+1 2014-01-14 12:59:38
jurkat.1640: 金币+3 2014-04-14 15:41:52
如果没有蛋白酶存在，4度对于保持蛋白构象好，但室温温度高亲和度要高。钓不到的原因很多，最有可能是你的靶蛋白变性了结构变了。

如果是1毫升枪头不需切，其它最好切一下。
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6楼2013-11-13 16:16:25
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shayin

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
你好，我现在也在用磁珠做IP钓互作蛋白，我想问您最后钓到蛋白了么，还是用了别的方法？
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你若盛开，碟自来。。。
7楼2016-11-01 16:25:48
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
7楼: Originally posted by shayin at 2016-11-01 16:25:48
你好，我现在也在用磁珠做IP钓互作蛋白，我想问您最后钓到蛋白了么，还是用了别的方法？

很多年了
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8楼2016-11-02 09:23:06
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shayin

新虫 (初入文坛)
内容已删除
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你若盛开，碟自来。。。
9楼2016-11-02 14:49:49
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