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汕头大学海洋科学接受调剂
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] 求教dynabeads磁珠做IP的几个问题

1.按照说明的量混合抗体与磁珠,室温30 min,未做交联,与蛋白质样品孵育4℃过夜,IP未钓到目的蛋白,操作上有什么问题?

2.蛋白G磁珠的直径好像比琼脂糖珠小很多,是否可以用未剪口的枪头吹洗?
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一步一步

木虫 (著名写手)

★ ★
137167741: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-27 21:06:22
不是很懂CoIP,但是接触过用磁珠做IP实验。所以在此有几个问题:
1. 你的磁珠和抗体为什么不交联?
2. 加磁珠的目的不就是让目的蛋白结合到抗体上,利用磁力作用去杂。不与磁珠交联,即使抗体与蛋白结合也不能与杂质蛋白区别,加磁珠还有什么用?
4楼2013-10-27 09:51:53
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jurkat.1640: 金币+1, 有帮助 2013-10-25 12:18:45
137167741: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-27 21:06:04
会不会目标蛋白的标识部分被包裹在内部?
2楼2013-10-24 22:51:22
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-10-24 22:51:22
会不会目标蛋白的标识部分被包裹在内部?

这个是另外一个问题,我主要关心的是操作上有没有问题,因为没做个磁珠的CoIP实验,也没人教
3楼2013-10-25 12:18:19
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 一步一步 at 2013-10-27 09:51:53
不是很懂CoIP,但是接触过用磁珠做IP实验。所以在此有几个问题:
1. 你的磁珠和抗体为什么不交联?
2. 加磁珠的目的不就是让目的蛋白结合到抗体上,利用磁力作用去杂。不与磁珠交联,即使抗体与蛋白结合也不能与杂 ...

说明书上说交联是选做项,而且交联有点麻烦所以没做。
蛋白G琼脂糖珠与抗体抗原孵育时是没有交联步骤。
5楼2013-10-27 18:03:38
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