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lb3522922

铜虫 (小有名气)

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[求助] 二次PCR

最近再做PCR，第一次的产物不特异，切胶回收后浓度有30ng/μL左右，然后以此为模板进行第二次PCR，具体做法是取1微升模板，引物与前次PCR相同，但是产物跑电泳却没有条带，只有引物二聚体附近的小条带。增加模板的量也不行，不知道问题出在什么地方了。请各位给分析分析。不胜感激。

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1楼 2013-10-22 14:14:05

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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 23:54:26

楼主，这个问题曾经困扰我了很久。
我的经验是二次PCR 效果都不是太好，如果需要改进的话我有两个办法：
1.就是设计巢式PCR引物，这样效果会好点；
2.就是把你的片段连到载体里，克隆扩增，酶切也可以；或者用质粒为模板也可以。

建议你不要在这方面浪费太多的时间，尽快跳过这一步，重新设计引物，或者连载体都不会花很多时间的