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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 二次PCR
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lb3522922

铜虫 (小有名气)

[求助] 二次PCR

最近再做PCR，第一次的产物不特异，切胶回收后浓度有30ng/μL左右，然后以此为模板进行第二次PCR，具体做法是取1微升模板，引物与前次PCR相同，但是产物跑电泳却没有条带，只有引物二聚体附近的小条带。增加模板的量也不行，不知道问题出在什么地方了。请各位给分析分析。不胜感激。
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1楼 2013-10-22 14:14:05
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lb3522922

铜虫 (小有名气)
增加模板也没作用，引物二聚体挺亮的。切胶回收后是用水洗脱的，应该没有其他缓冲液了。我做二次PCR的目的是想做基因克隆，第一次PCR后回收的量少，无法进行下面的实验。
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7楼2013-10-29 13:58:42
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cicisnow

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-29 01:38:23
你用什么酶扩增的，有些酶对模板要求很高的
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2楼2013-10-28 21:00:23
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素手就琴

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你说你第一次的产物不特异，那要带marker ，确定你切胶回收的是你需要的那个条带，别切错了。你增加模板，引物二聚体有没有很亮？
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人生多烦忧，不如一吊解千愁~
4楼2013-10-29 11:59:24
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wuyao0513

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是切胶回收后的缓冲液对Taq酶有影响！！
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5楼2013-10-29 12:00:14
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