24小时热门版块排行榜    

查看: 1500  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lb3522922

铜虫 (小有名气)

[求助] 二次PCR

最近再做PCR,第一次的产物不特异,切胶回收后浓度有30ng/μL左右,然后以此为模板进行第二次PCR,具体做法是取1微升模板,引物与前次PCR相同,但是产物跑电泳却没有条带,只有引物二聚体附近的小条带。增加模板的量也不行,不知道问题出在什么地方了。请各位给分析分析。不胜感激。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lb3522922

铜虫 (小有名气)

增加模板也没作用,引物二聚体挺亮的。切胶回收后是用水洗脱的,应该没有其他缓冲液了。我做二次PCR的目的是想做基因克隆,第一次PCR后回收的量少,无法进行下面的实验。
7楼2013-10-29 13:58:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cicisnow

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-29 01:38:23
你用什么酶扩增的,有些酶对模板要求很高的
2楼2013-10-28 21:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

素手就琴

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你说你第一次的产物不特异,那要带marker ,确定你切胶回收的是你需要的那个条带,别切错了。你增加模板,引物二聚体有没有很亮?
人生多烦忧,不如一吊解千愁~
4楼2013-10-29 11:59:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuyao0513

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

应该是切胶回收后的缓冲液对Taq酶有影响!!
5楼2013-10-29 12:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 +3 ziyangfang 2026-08-25 3/150 2026-08-25 13:14 by huagongfeihu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见