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拟南芥kana抗性筛选
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| 我想进行拟南芥筛选，抗性为kana,,具体操作步骤是怎么的呢？ |
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cicelyzh
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2楼2013-10-18 23:39:39
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:53:30
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 楼上说的都切中要害，就是在萌芽的普通培养基中加上kan筛选，转基因的种子有抗性，可以在上面生长，而普通种子则慢慢发黄死去，如此达到筛选转基因苗的目的！ 无论从时间上还是工作量方面讲，转基因的种子得来都不易，所以有几个细节需要注意！1）拟南芥比较脆弱，如果条件摸索不好，种植比较难以成功，所以建议楼主筛选的时候分批次种植，留点种子备用，以防万一！ 2）培养基萌芽特别容易污染，而抗性板筛选相对而言生长周期长点，所以避免污染是至关重要的。所以建议楼主这样：  拟南芥种子收取时尽量只收取果荚（全部装塑料袋再收种子容易有杂质，分不开），精心处理，去除杂志；备份一些种子分批种植，种植的种子先用70%-75%酒精浸泡消毒10分钟左右，期间间断性地颠倒。倒去酒精，改用升汞或者20%漂渍液（普通种植此步即可）浸泡消毒10分钟，方法同上。后用灭菌的dd水洗3-5遍；超净台内待抗性平板吹干后，用无菌枪头将种子转移至平板上，加几毫升无菌水，小幅度上下左右慢慢晃动，待种子分布较为均匀时抽去一些水，继续晃动，知道达到理想分布，然后抽尽可见水分，超净台内吹干。操作期间切记手在培养基上方晃动，尽可能降低污染的机会！封口膜可口！4度冰箱（正着放）春化两天，如有必要，可再次放入超净台吹干，封口膜封口！转入温室培养培养期间可增施营养液，适量浇水，避免过干或过湿。经常查看，一看环境温度，二看水分，三看是否有蘑菇蝇或者蚜虫滋生！ 祝楼主一切顺利！ |
6楼2013-11-04 20:45:08
7楼2013-11-05 00:01:29
yudaoqian88
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