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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 拟南芥kana抗性筛选
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as023

银虫 (小有名气)

[求助] 拟南芥kana抗性筛选

我想进行拟南芥筛选，抗性为kana,,具体操作步骤是怎么的呢？
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1楼 2013-10-18 23:13:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-19 01:25:40
到含有卡那霉素抗性（10μg/ml）的MS平板，把种子在超净台里消毒，用无菌牙签把转移到平板上，4°C放置2天后放关照培养箱里正置培养约2周，抗性苗可以转到土里继续培养。
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2楼2013-10-18 23:39:39
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as023

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-18 23:39:39
到含有卡那霉素抗性（10μg/ml）的MS平板，把种子在超净台里消毒，用无菌牙签把转移到平板上，4°C放置2天后放关照培养箱里正置培养约2周，抗性苗可以转到土里继续培养。

因为我想看分离比率，用不用避光呢
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3楼2013-10-19 12:54:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-20 10:00:26
as023: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-10-23 23:03:40
引用回帖:
3楼: Originally posted by as023 at 2013-10-19 12:54:43
因为我想看分离比率，用不用避光呢...

你指什么时候避光？你需要完全暗下培养拟南芥吗？如果你的突变株是光敏感的，需要适当改变光照条件。
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4楼2013-10-20 01:04:38
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zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
as023: 金币+2 2013-10-23 23:03:44
不需要特殊条件，和正常的野生型一样操作，不同的就是MS里面加上KANA，浓度自己查下。大约7-10天就可以数分离比了。
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5楼2013-10-20 10:23:49
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:53:30
楼上说的都切中要害，就是在萌芽的普通培养基中加上kan筛选，转基因的种子有抗性，可以在上面生长，而普通种子则慢慢发黄死去，如此达到筛选转基因苗的目的！
无论从时间上还是工作量方面讲，转基因的种子得来都不易，所以有几个细节需要注意！
1）拟南芥比较脆弱，如果条件摸索不好，种植比较难以成功，所以建议楼主筛选的时候分批次种植，留点种子备用，以防万一！
2）培养基萌芽特别容易污染，而抗性板筛选相对而言生长周期长点，所以避免污染是至关重要的。所以建议楼主这样：
     拟南芥种子收取时尽量只收取果荚（全部装塑料袋再收种子容易有杂质，分不开），精心处理，去除杂志；
     备份一些种子分批种植，种植的种子先用70%-75%酒精浸泡消毒10分钟左右，期间间断性地颠倒。倒去酒精，改用升汞或者20%漂渍液（普通种植此步即可）浸泡消毒10分钟，方法同上。后用灭菌的dd水洗3-5遍；
     超净台内待抗性平板吹干后，用无菌枪头将种子转移至平板上，加几毫升无菌水，小幅度上下左右慢慢晃动，待种子分布较为均匀时抽去一些水，继续晃动，知道达到理想分布，然后抽尽可见水分，超净台内吹干。操作期间切记手在培养基上方晃动，尽可能降低污染的机会！封口膜可口！
     4度冰箱（正着放）春化两天，如有必要，可再次放入超净台吹干，封口膜封口！转入温室培养
     培养期间可增施营养液，适量浇水，避免过干或过湿。经常查看，一看环境温度，二看水分，三看是否有蘑菇蝇或者蚜虫滋生！
祝楼主一切顺利！
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
6楼2013-11-04 20:45:08
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as023

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2013-11-04 20:45:08
楼上说的都切中要害，就是在萌芽的普通培养基中加上kan筛选，转基因的种子有抗性，可以在上面生长，而普通种子则慢慢发黄死去，如此达到筛选转基因苗的目的！
无论从时间上还是工作量方面讲，转基因的种子得 ...

非常好，谢谢你
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7楼2013-11-05 00:01:29
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
引用回帖:
7楼: Originally posted by as023 at 2013-11-05 00:01:29
非常好，谢谢你...

客气哈，相互学习，共同进步！
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
8楼2013-11-05 20:38:48
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