应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实时荧光定量pcr，cDNA的加入量会影响结果的准确度吗？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 7769  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

963979587

银虫 (初入文坛)

[求助] 实时荧光定量pcr，cDNA的加入量会影响结果的准确度吗？

大家好，最近一直做荧光定量pcr，20ul体系中3ug的rna反转录得到的cDNA，取4ul作为pcr的模板，10ul EvaGreen，4ul引物，2ulRNas水，这个体系可以得到挺好的结果，但是溶解曲线的温度在77°，不知道是不是引物二聚体，而且我觉得模板的量加的太多了，实验不能重复，一次就用光了，不知道是不是应该稀释一下？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-10-14 15:54:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学海打浪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般情况下溶解曲线都是在80度以上，你那个很有可能是引物二聚体
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2013-10-16 11:03:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-15 10:27:19
你的模板用量不是一般的大。通常情况下是用1μg RNA反转录后稀释5倍后取1μl做模板。把熔解曲线图发上来看看。CT值是多少？是否在15-30之间？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-10-14 22:31:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

asr

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-15 10:27:28
20ul体系中3ug的rna反转录得到的cDNA，取4ul作为pcr的模板  

量明显太高了，先摸摸条件呀
赞一下(2人) 回复此楼
思想极度邪恶，勿怕勿怪！\(^o^)/~
3楼2013-10-14 23:29:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

963979587

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-14 22:31:01
你的模板用量不是一般的大。通常情况下是用1μg RNA反转录后稀释5倍后取1μl做模板。把熔解曲线图发上来看看。CT值是多少？是否在15-30之间？

目的基因VCAM的CT值在25个循环左右，GAPDH在19个循环这儿，基本上都有平台期，
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-10-15 10:20:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +8 勇敢的小吴 2026-04-02 8/400 2026-04-02 10:48 by oooqiao
[考研] 324求调剂 +4 想上学求调 2026-04-02 4/200 2026-04-02 10:00 by olim
[考研] 【求调剂】新能源材料本科，一志愿211，初试321 +6 求调剂学校， 2026-04-02 6/300 2026-04-02 09:41 by 晴空210210
[考研] 303求调剂 +8 DLkz1314. 2026-03-30 8/400 2026-04-02 09:08 by sanrepian
[考研] 266求调剂 +10 阳阳哇塞 2026-04-01 10/500 2026-04-02 09:07 by vgtyfty
[考研] 调剂推荐 +10 清酒714 2026-03-26 12/600 2026-04-02 07:57 by 尚水阁主
[考研] 085602化学工程268分蹲调剂 +8 月照花林。 2026-04-01 8/400 2026-04-01 22:08 by 无际的草原
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +4 嘿嘿uu 2026-04-01 4/200 2026-04-01 20:42 by 无懈可击111
[考研] 070300一志愿211，312分求调剂院校 +14 小黄鸭宝 2026-03-30 14/700 2026-04-01 20:19 by 赖春艳
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-31 11/550 2026-04-01 09:43 by xiayizhi
[考研] 土木304求调剂 +3 兔突突突， 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:42 by JourneyLucky
[考研] 336材料求调剂 +10 陈滢莹 2026-03-26 12/600 2026-03-31 17:59 by jp9609
[考研] 086000调剂 +5 7901117076 2026-03-26 5/250 2026-03-31 17:45 by 544594351
[考研] 生医工0831调剂求推荐 +4 小熊睿睿_s 2026-03-27 6/300 2026-03-31 17:12 by 记事本2026
[考研] 272求调剂，接受跨专业调剂！ +3 闲鱼卢 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:00 by 替代品000
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-03-29 9/450 2026-03-30 21:02 by dophin1985
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-27 6/300 2026-03-28 14:10 by 唐沐儿
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭