| 查看: 4640 | 回复: 14 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
1989zb金虫 (小有名气)
|
[求助]
怎么做融合蛋白？
|
|
|
现在准备做一个融合蛋白，有两种方法不知道该用哪种好呢？ 第一种：通过去掉第一个蛋白的终止子，用linker连接第二个蛋白，不知道怎么选择linker? 第二种：通过融合PCR 扩增出两个蛋白的基因全长 ，第一个蛋白的基因序列也去掉终止子， 请问这两种方法哪种更好点呢？？？ 还有就是怎么设计linker呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有96人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
1989zb
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1734.4
- 帖子: 268
- 在线: 177.3小时
- 虫号: 1387794
- 注册: 2011-09-02
- 性别: GG
- 专业: 兽医免疫学
12楼2013-10-14 15:07:37
fuyuandj86
版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.015
- 金币: 7553.2
- 散金: 493
- 红花: 60
- 沙发: 2
- 帖子: 1312
- 在线: 1346.1小时
- 虫号: 544795
- 注册: 2008-04-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
- 管辖: 生物科学
2楼2013-10-12 23:25:36
xiaozhu20131
新虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 593.7
- 红花: 1
- 帖子: 188
- 在线: 17.8小时
- 虫号: 2626126
- 注册: 2013-08-31
- 专业: 人类遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1989zb: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-13 09:36:51
感谢参与，应助指数 +1
1989zb: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-13 09:36:51
|
构建融合蛋白的基本原则是， 将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，以实现两个基因的共同表达。具体步骤有： 1.进行目的基因的克隆：根据基因序列互补原则 ，设计合适的引物序列，以cDNA为模板，利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段。 2.在载体中进行重组：通过限制内切酶将两个DNA片段进行酶切并回收，然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片段进行体外连接，并克隆到高表达质粒载体中，构建重组质粒。 3.将重组表达载体转染宿主细胞并利用选择标志进行筛选及测序。 4.融合基因的诱导表达及表达蛋白的纯化 。 |
3楼2013-10-13 07:46:23
1989zb
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1734.4
- 帖子: 268
- 在线: 177.3小时
- 虫号: 1387794
- 注册: 2011-09-02
- 性别: GG
- 专业: 兽医免疫学
4楼2013-10-13 09:36:40