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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 奇怪的生长曲线
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翠微帝子

铜虫 (小有名气)

[求助] 奇怪的生长曲线

各位大虾，这是我做的酵母的生长曲线。我做了三次了，每次都是3个平行样。但是这三次实验的生长趋势都是这样的。在大概32h 的时候OD值突然下降，在大概40h时又突然上升。之后就一直波动，没有明显的稳定期。
   我的培养基中的碳源是葡萄糖和果糖的混合物，不知道是不是碳源影响，才会出现突降和突升的现象。还有就是为什么在后期一直都在波动呢？
   不知道是什么原因，烦请各位大虾指点下~谢谢~！
奇怪的生长曲线
1.jpg
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1楼 2013-10-11 22:02:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
翠微帝子: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-10-12 09:21:16
做细胞计数了吗？可能不同生长时期和碳源影响细胞大小，从而影响光密度。如果做了平行样品，最好在图上标明误差。
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2楼2013-10-12 04:08:52
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翠微帝子

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-12 04:08:52
做细胞计数了吗？可能不同生长时期和碳源影响细胞大小，从而影响光密度。如果做了平行样品，最好在图上标明误差。

没有做细胞计数。我做了3组平行样，但是这3组之间的误差随着时间的增加而增加了很多。还有就是如果培养基中含有果糖，能不能用高压灭菌呀？我的培养基在灭菌的时候是115℃，果糖会不会形成焦糖？
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3楼2013-10-12 09:23:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 翠微帝子 at 2013-10-12 09:23:59
没有做细胞计数。我做了3组平行样，但是这3组之间的误差随着时间的增加而增加了很多。还有就是如果培养基中含有果糖，能不能用高压灭菌呀？我的培养基在灭菌的时候是115℃，果糖会不会形成焦糖？...

平行样本之间的误差随培养时间增加属于正常现象，不知道最后误差有多大呢？糖类高压灭菌一般会遭到一定程度上的破坏，115°C会比121°C好一些。如果规模不是很大，可以把糖做成母液过滤除菌，把培养基其它成分高压灭菌后再在超净台中添加。
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4楼2013-10-13 00:55:50
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翠微帝子

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-13 00:55:50
平行样本之间的误差随培养时间增加属于正常现象，不知道最后误差有多大呢？糖类高压灭菌一般会遭到一定程度上的破坏，115°C会比121°C好一些。如果规模不是很大，可以把糖做成母液过滤除菌，把培养基其它成分高压 ...

我用的500ml 的瓶子，里面有100 ml 的发酵液。添加误差线之后的图是这样的。
在测OD值的时候，我是在超净台外面用打开空白发酵液的瓶子取液，对样品进行稀释的。会不会是空白发酵液被污染了？
奇怪的生长曲线-1
1.jpg
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5楼2013-10-13 11:13:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
翠微帝子: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-10-13 19:00:48
引用回帖:
5楼: Originally posted by 翠微帝子 at 2013-10-13 11:13:38
我用的500ml 的瓶子，里面有100 ml 的发酵液。添加误差线之后的图是这样的。
在测OD值的时候，我是在超净台外面用打开空白发酵液的瓶子取液，对样品进行稀释的。会不会是空白发酵液被污染了？

1.jpg
...

取样品和空白都应该在超净台里操作。超净台外面取空白会造成污染，尤其是你需要检测长时间，空白污染会对结果造成影响。至于取液后的稀释，如果你愿意，可以在超净台外面做。从你的生长曲线看，第一个下降可能和偏好碳源的消耗有关，后面的波动有可能是测定误差造成的。最后的下降可能与可利用碳源消耗有关。
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6楼2013-10-13 16:50:27
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wangl2037

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
翠微帝子: 金币+1, ★有帮助 2013-10-13 19:16:54
有些时候会出现二次生长现象，但是用在你这个图上貌似也不能解释。
一般跟C/N源有关吧，有些是迟效的，菌体到后期生长环境变差了，有一个调整过程，开始利用迟效C/N源。

PS：你可以换个检测方法试下，比如菌体湿重、干重，可以验证下。
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7楼2013-10-13 17:05:48
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