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金虫 (初入文坛)

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[求助] 血小板黏附实验拍电镜未得到想要的结果一些问题

最近在做血小板黏附实验，拍了几次SEM感觉制样失败，请大家帮忙看看是哪里出了问题，热烈欢迎多多讨论。
材料是薄膜形态。
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富血小板血浆（PRP)制备：采用的是兔血，耳缘取血后，以 9:1 与 109 mol/L 柠檬酸三钠溶液混合，1200rpm 离心15min，取上层清液。
黏附过程：37℃，将材料浸泡1h；PBS轻轻洗涤；用2.5%戊二醛-PBS溶液在4℃下固定24h;乙醇-水溶液(30,50,70,80,90,95,100%)梯度脱水,每个梯度30min;喷金测SEM.
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拍得电镜图如下

文献中的如下

和文献对比发现完全不像

，拍出来椭圆状的不像血小板有伪足伸出。
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疑问：1.PRP的制备中是不是有问题，而导致没有收集到富含血小板的血浆;
      2.有些文献中梯度脱水溶液是用乙醇和PBS配制的，但是乙醇含量50%以后就会出现浑浊，应该是盐在乙醇中的溶解度下降导致的，所以不清楚这个乙醇-PBS到底是怎么配制的；
      3.电镜图上有些点，没有具体形貌，会不会是操作过程中混入的脏东西;
      4.最后的干燥，如果不用冻干机，置于干燥器中自然晾干是否可行呢.

各位前辈大牛，求解答。。。

[ Last edited by wwsswww on 2013-10-11 at 10:23 ]

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1楼 2013-10-11 10:20:18

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酷酷墨镜

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wwsswww: 金币+5 2013-10-18 08:52:05

1.http://dx.doi.org/10.1021/am403365j 这是我们刚发表的文章，有血小板吸附的实验
2.我参考的一篇重要文献，里面也有血小板吸附：Zhou, W. R.; Zheng, Y. F.; Leeflang, M. A.; Zhou, J. Acta Biomater. 2013 , 9, 8488 − 8498.
希望对楼主有帮助：）