| 查看: 910 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
关于一氧化氮或一氧化氮合成酶的检测问题
|
||
|
我将一段一氧化氮合成酶的基因转染进了细胞。现在想检测一下它的表达。有没有同学做过一氧化氮合成酶或一氧化氮的检测？我查到一氧化氮合成酶可以用elisa，western，还有南京建成生物研究所的一氧化氮合成酶检测试剂盒，说是用的比色法，我没太明白这个比色法出来的结果是什么样的？观察颜色的深浅吗？有没有同学做过？ 一氧化氮的检测也是有试剂盒，分荧光法和比色法。可是一氧化氮不是微溶于水么？怎么收集呢？在细胞培养过程中不会损失吗？ 有做过这个的同学请给我个建议？哪个方法比较好，并且比较经济。我只要能证明我转染的细胞表达得比没转染的多就行了。半定量就好。 |
回复此楼» 猜你喜欢
0856调剂，是学校就去
已经有9人回复
-
298-一志愿中国农业大学-求调剂
已经有9人回复
-
265求调剂
已经有7人回复
-
求调剂
已经有4人回复
-
学校已经提交到NSFC，还能修改吗？
已经有7人回复
-
材料学硕297已过四六级求调剂推荐
已经有6人回复
-
295复试调剂
已经有7人回复
-
本人考085602 化学工程 专硕
已经有20人回复
-
一志愿中南化学337求调剂
已经有5人回复
-
281求调剂（0805）
已经有23人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 非模式植物怎么研究信号通路
已经有13人回复
- 请问什么物质可以在常温常压把一氧化氮（NO）还原？
已经有7人回复
- 一氧化氮与氧气反应机理
已经有3人回复
- 【求助】一氧化氮和二氧化氮的盐酸萘乙二胺分光光度法
已经有4人回复
- 云南农业大学中标项目(21)
已经有14人回复
- 省级基金申请书【外源NO对盐分胁迫下小麦幼苗生长的影响】修改后共享
已经有18人回复
- 【讨论】2010年研发中的药物潜力侦探
已经有19人回复
- 【求助】一氧化氮可溶于哪些有机溶剂
已经有3人回复
4楼2014-03-30 10:32:29
yang0071
木虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-10-11 16:57:39
yang0071
木虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 207 (大学生)
- 金币: 1573.4
- 散金: 9319
- 红花: 21
- 帖子: 4041
- 在线: 647.7小时
- 虫号: 50941
- 注册: 2004-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
★ ★ ★
wizardfan: 金币+3, 感谢详细解答 2013-10-13 07:50:16
wizardfan: 金币+3, 感谢详细解答 2013-10-13 07:50:16
|
使用说明： 1. 取出Griess Reagent I和II，使回复室温。 2. 用待测样品所用溶液稀释标准品(1-100μM)。 例如样品为细胞培养液上清，细胞培养液为DMEM＋10%FBS，则用DMEM＋10%FBS稀释标准品。通常标准品 的浓度可取0, 1, 2, 5, 10, 20, 40, 60, 100μM。 3. 按50μl/孔，在96孔板中加入标准品及样品。 样品为培养液上清，可以直接取样，如果有可沉淀物则需离心后取上清。如样品为细胞或组织，可以快 速冻融裂解，然后离心沉淀取上清，体积不足50μl可以用重蒸水或0.9%NaCl稀释(相应地标准品也需用 重蒸水或0.9%NaCl稀释)。细胞或组织也可以用用于Western或IP的裂解液(无需添加抑制剂)裂解，同样 标准品也需相应稀释。碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)或各种RIPA裂解液裂解细胞后适用 于一氧化氮的测定。 4. 按50μl/孔，在各孔中加入室温Griess Reagent I。 5. 按50μl/孔，各孔中加入室温Griess Reagent II。 6. 540nm 测定吸光度。 如无540nm滤光片，520-560nm的滤光片也可。如无酶标仪或合适的滤光片，也可以通过目测比色，确定 样品中一氧化氮的浓度。目测比色时标准品需要更为精细的浓度梯度。 |
3楼2013-10-11 16:58:50
5楼2014-06-23 20:31:08
