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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗

[求助] 细菌真的这么容易死么? 已有1人参与

现在做的实验是研究表面杀菌中定量研究对大肠杆菌的杀灭效率。
受限于实验条件,必须将菌液滴在载玻片上风干,然后杀菌,再然后振荡清洗计数。
刚开始做杀菌数据一直不稳定,后来一个因素一个因素排除,昨天的实验才发现,原来液体培养基10e9级别的菌液(100微升,下同。)滴在载玻片上风干1小时后(超净工作台,3档风),直接计数测得所得菌液细菌浓度只有10e5级别。
想问的是细菌在常温下这么容易挂么? 之前用无菌水配置的菌液,计数结果表明全部挂了。
要是这个制作载片的过程细菌都死了。那也不能证明是我的杀菌器械的作用啊。愁。求高手解答之。
晚上准备做做细菌风干后会死多少的实验,想法是直接针对扩大培养(大肠杆菌+LB液体培养基)菌液计数,然后分别用LB培养基,无菌水,生理盐水稀释一次后 涂片,再风干,然后再对载片振荡并稀释计数。这样能行么?

[ Last edited by worldbetter on 2013-10-9 at 13:35 ]
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自信,是有技术含量的自负。自卑,是没技术含量的自尊。
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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗

引用回帖:
4楼: Originally posted by eagles123 at 2013-10-09 15:11:52
你震荡清洗能把多少细胞清洗下来?如果你每次涂片的面积,菌量不同等因素,你能洗下来的量都是不同的。另外,大肠杆菌等在逆境中会进入VBNC(Viable but nonculturable)状态, 而正常培养后 可能在48-72h后复苏。( ...

培养48小时菌落数也不会增加。
此前我担心是细菌不从玻璃片上脱落。后来我用无菌纱布擦拭效果不错。
我是想问问 生理盐水的菌液风干会不会导致细胞死亡,如果会就不用做实验检测了。。。
自信,是有技术含量的自负。自卑,是没技术含量的自尊。
5楼2013-10-09 16:38:44
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phyllislhy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
最好用生理盐水,无菌水可能与菌体细胞非等渗,时间长容易造成菌体细胞破裂
2楼2013-10-09 14:38:56
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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗

引用回帖:
2楼: Originally posted by phyllislhy at 2013-10-09 14:38:56
最好用生理盐水,无菌水可能与菌体细胞非等渗,时间长容易造成菌体细胞破裂

生理盐水我考虑过,风干成菌膜的过程中 盐的浓度增大,细菌照样会菌体破裂死亡啊。。。所以才纠结。
自信,是有技术含量的自负。自卑,是没技术含量的自尊。
3楼2013-10-09 14:50:16
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eagles123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
worldbetter(amisking代发): 金币+2, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-10-09 18:12:03
你震荡清洗能把多少细胞清洗下来?如果你每次涂片的面积,菌量不同等因素,你能洗下来的量都是不同的。另外,大肠杆菌等在逆境中会进入VBNC(Viable but nonculturable)状态, 而正常培养后 可能在48-72h后复苏。(具体时间要查文献) 所以要延长培养时间来确保杀菌效率。
4楼2013-10-09 15:11:52
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