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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌真的这么容易死么？
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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗

[求助] 细菌真的这么容易死么？ 已有1人参与

现在做的实验是研究表面杀菌中定量研究对大肠杆菌的杀灭效率。
受限于实验条件，必须将菌液滴在载玻片上风干，然后杀菌，再然后振荡清洗计数。
刚开始做杀菌数据一直不稳定，后来一个因素一个因素排除，昨天的实验才发现，原来液体培养基10e9级别的菌液（100微升，下同。）滴在载玻片上风干1小时后（超净工作台，3档风），直接计数测得所得菌液细菌浓度只有10e5级别。
想问的是细菌在常温下这么容易挂么？ 之前用无菌水配置的菌液，计数结果表明全部挂了。
要是这个制作载片的过程细菌都死了。那也不能证明是我的杀菌器械的作用啊。愁。求高手解答之。
晚上准备做做细菌风干后会死多少的实验，想法是直接针对扩大培养（大肠杆菌+LB液体培养基）菌液计数，然后分别用LB培养基，无菌水，生理盐水稀释一次后 涂片，再风干，然后再对载片振荡并稀释计数。这样能行么？

[ Last edited by worldbetter on 2013-10-9 at 13:35 ]
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自信，是有技术含量的自负。自卑，是没技术含量的自尊。
1楼 2013-10-09 13:33:38
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eagles123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
worldbetter(amisking代发): 金币+2, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-10-09 18:12:03
你震荡清洗能把多少细胞清洗下来？如果你每次涂片的面积，菌量不同等因素，你能洗下来的量都是不同的。另外，大肠杆菌等在逆境中会进入VBNC（Viable but nonculturable)状态， 而正常培养后 可能在48-72h后复苏。（具体时间要查文献） 所以要延长培养时间来确保杀菌效率。
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4楼2013-10-09 15:11:52
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
貌似各种杀菌实验，没有那么长的时间，一般都是5分10分的，最多半个小时。

而且，一般做的是抑菌实验，不是杀菌实验。

你用的是大肠杆菌，不是芽孢杆菌，风干是很明显的抑菌甚至杀菌因素，而你做的是研究，

就要考虑到通过实验设计排除掉除研究因素外其他因素的干扰，同时也要考虑研究因素与干扰因素的联合效应。

因此，你可以设立一组对照实验，一组不是医疗器械，一组是医疗器械，用对照组去除干扰因素。
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环境卫生、微生物学、卫生应急
6楼2013-10-11 08:29:17
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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗
引用回帖:
7楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-11 12:28:36
直接计数来做不行吗？不是有一种区分死菌活菌的染色方法吗，不过这样会很麻烦把！

那种方法只能用来定性研究。我现在要定量研究杀菌效果。
等离子体杀菌的时候喷出的时候会有气流，气流吹动水滴（菌液）会让它到周围非有效杀菌区域 效果就不好了。所以得想办法把细菌固定。并且控制在比较小的范围。
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自信，是有技术含量的自负。自卑，是没技术含量的自尊。
8楼2013-10-11 14:43:42
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普通回帖

phyllislhy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最好用生理盐水，无菌水可能与菌体细胞非等渗，时间长容易造成菌体细胞破裂
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2楼2013-10-09 14:38:56
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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗
引用回帖:
2楼: Originally posted by phyllislhy at 2013-10-09 14:38:56
最好用生理盐水，无菌水可能与菌体细胞非等渗，时间长容易造成菌体细胞破裂

生理盐水我考虑过，风干成菌膜的过程中 盐的浓度增大，细菌照样会菌体破裂死亡啊。。。所以才纠结。
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3楼2013-10-09 14:50:16
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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗
引用回帖:
4楼: Originally posted by eagles123 at 2013-10-09 15:11:52
你震荡清洗能把多少细胞清洗下来？如果你每次涂片的面积，菌量不同等因素，你能洗下来的量都是不同的。另外，大肠杆菌等在逆境中会进入VBNC（Viable but nonculturable)状态， 而正常培养后 可能在48-72h后复苏。（ ...

培养48小时菌落数也不会增加。
此前我担心是细菌不从玻璃片上脱落。后来我用无菌纱布擦拭效果不错。
我是想问问 生理盐水的菌液风干会不会导致细胞死亡，如果会就不用做实验检测了。。。
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自信，是有技术含量的自负。自卑，是没技术含量的自尊。
5楼2013-10-09 16:38:44
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接计数来做不行吗？不是有一种区分死菌活菌的染色方法吗，不过这样会很麻烦把！
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www------sr-------------
7楼2013-10-11 12:28:36
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by worldbetter at 2013-10-11 14:43:42
那种方法只能用来定性研究。我现在要定量研究杀菌效果。
等离子体杀菌的时候喷出的时候会有气流，气流吹动水滴（菌液）会让它到周围非有效杀菌区域 效果就不好了。所以得想办法把细菌固定。并且控制在比较小的范围 ...

这样啊，那上面mizhoulong的方法就很好啊，你做个对照，至于用生理盐水或无菌水都容易死的话，那你就直接用菌液好了，直接用菌液应该不会死很多吧，我知道有种产品（冠菌龙）就是将菌吸附在载体上然后风干，或者试试磷酸缓冲液。
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www------sr-------------
9楼2013-10-11 15:11:43
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worldbetter

至尊木虫 (著名写手)

工地狗 单身狗
引用回帖:
9楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-11 15:11:43
这样啊，那上面mizhoulong的方法就很好啊，你做个对照，至于用生理盐水或无菌水都容易死的话，那你就直接用菌液好了，直接用菌液应该不会死很多吧，我知道有种产品（冠菌龙）就是将菌吸附在载体上然后风干，或者试 ...

我昨天用培养基，生理盐水，PBS分别稀释然后风干后测所剩细菌了。
结果表明PBS的效果最好。准备采用这个了。
祝我杀菌过程顺利吧。今天做个杀菌试验看看还有没有异常数据。
这次不让风干得太厉害。
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自信，是有技术含量的自负。自卑，是没技术含量的自尊。
10楼2013-10-11 15:39:21
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