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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 酵母平板

刚做了转化,用的是毕赤酵母,涂板后3天长出来的菌落so奇怪,以至于我就不淡定了,平板是倒置的,结果菌落是细丝状的垂直于平板生长,也是白色的,当然平板上也有那种很保守形态的酵母菌落,目前就是想知道这种到底是不是酵母,这个平板上的单克隆能不能用呢
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让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
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cuicchao

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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静安jingan: 金币+5, 有帮助 2013-10-09 09:33:01
高拷贝不是用G418筛选么,为什么你的抗生素见光分解?不知道你的平板是不是MD平板,涂了MD平板的可以直接高拷贝筛选的
好心态;年轻派
5楼2013-10-08 22:30:00
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shyh1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-08 16:00:24
静安jingan: 金币+8 2013-10-09 09:32:32
个人认为,首先应该确认平板上其他单克隆菌落的形态是否为酵母的典型形态(如菌落饱满、圆润、乳白色),是否有酵母特有的气味。确认确实如此之后,建议楼主进行高拷贝筛选,并进行PCR鉴定,这样就确保筛选到阳性转化子,而且如能筛选到高拷贝转化子在理论上能显著提高表达量,对后续的表达纯化非常有利。
2楼2013-10-08 14:48:02
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shyh1983 at 2013-10-08 14:48:02
个人认为,首先应该确认平板上其他单克隆菌落的形态是否为酵母的典型形态(如菌落饱满、圆润、乳白色),是否有酵母特有的气味。确认确实如此之后,建议楼主进行高拷贝筛选,并进行PCR鉴定,这样就确保筛选到阳性转 ...

怎么搞拷贝筛选啊,第一次听说。
我刚刚才想到一种可能性,我的抗生素会见光失效,所以是涂板的时候提前涂上去的,先涂抗生素,再涂转化后的菌液,在涂的时候可能会某种原因,使菌液在抗生素下层,所以可以生长,到抗生素那层的时候由于没有抗性,外围的就没有长起来,但是内部没有直接接触抗生素,所以可以生长,所以就形成了这种古怪的形态。估计假阳性的可能大。
早上涂片看了一下,都是酵母菌,唯一的区别就是普通菌落大部分处于生长期,分裂的很少;而菌落形状奇怪的则大部分处于分裂期
让复杂的事情变简单,简单的事情更简单
3楼2013-10-08 14:54:12
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ndsc

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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静安jingan: 金币+5 2013-10-09 09:32:41
没错的,鉴定是否阳性就ok了,一般双转,双筛要2-3天,双转3-4筛要5-8天。没问题的放心吧。
4楼2013-10-08 17:57:20
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