应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母平板
71/1返回列表
查看: 2025  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

[求助] 酵母平板

刚做了转化，用的是毕赤酵母，涂板后3天长出来的菌落so奇怪，以至于我就不淡定了，平板是倒置的，结果菌落是细丝状的垂直于平板生长，也是白色的，当然平板上也有那种很保守形态的酵母菌落，目前就是想知道这种到底是不是酵母，这个平板上的单克隆能不能用呢
回复此楼

» 猜你喜欢
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
1楼 2013-10-08 10:29:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyh1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-08 16:00:24
静安jingan: 金币+8 2013-10-09 09:32:32
个人认为，首先应该确认平板上其他单克隆菌落的形态是否为酵母的典型形态（如菌落饱满、圆润、乳白色），是否有酵母特有的气味。确认确实如此之后，建议楼主进行高拷贝筛选，并进行PCR鉴定，这样就确保筛选到阳性转化子，而且如能筛选到高拷贝转化子在理论上能显著提高表达量，对后续的表达纯化非常有利。
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-08 14:48:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shyh1983 at 2013-10-08 14:48:02
个人认为，首先应该确认平板上其他单克隆菌落的形态是否为酵母的典型形态（如菌落饱满、圆润、乳白色），是否有酵母特有的气味。确认确实如此之后，建议楼主进行高拷贝筛选，并进行PCR鉴定，这样就确保筛选到阳性转 ...

怎么搞拷贝筛选啊，第一次听说。
我刚刚才想到一种可能性，我的抗生素会见光失效，所以是涂板的时候提前涂上去的，先涂抗生素，再涂转化后的菌液，在涂的时候可能会某种原因，使菌液在抗生素下层，所以可以生长，到抗生素那层的时候由于没有抗性，外围的就没有长起来，但是内部没有直接接触抗生素，所以可以生长，所以就形成了这种古怪的形态。估计假阳性的可能大。
早上涂片看了一下，都是酵母菌，唯一的区别就是普通菌落大部分处于生长期，分裂的很少；而菌落形状奇怪的则大部分处于分裂期
赞一下 回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
3楼2013-10-08 14:54:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ndsc

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
静安jingan: 金币+5 2013-10-09 09:32:41
没错的，鉴定是否阳性就ok了，一般双转，双筛要2-3天，双转3-4筛要5-8天。没问题的放心吧。
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-08 17:57:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuicchao

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
静安jingan: 金币+5, ★有帮助 2013-10-09 09:33:01
高拷贝不是用G418筛选么，为什么你的抗生素见光分解？不知道你的平板是不是MD平板，涂了MD平板的可以直接高拷贝筛选的
赞一下 回复此楼
好心态；年轻派
5楼2013-10-08 22:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shyh1983

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
静安jingan: 金币+7, ★★★很有帮助 2013-10-09 09:33:24
引用回帖:
3楼: Originally posted by 静安jingan at 2013-10-08 14:54:12
怎么搞拷贝筛选啊，第一次听说。
我刚刚才想到一种可能性，我的抗生素会见光失效，所以是涂板的时候提前涂上去的，先涂抗生素，再涂转化后的菌液，在涂的时候可能会某种原因，使菌液在抗生素下层，所以可以生长， ...

高拷贝筛选就是利用抗生素进行梯度筛选。pPIC3.5K/pPIC9K等载体用G418梯度平板筛选，pPICZα系列的载体用博来霉素（Zeocin）筛选，根据楼主的描述所用抗生素会见光分解，那么猜测楼主所用的抗生素应该是Zeocin。方法是先将所有的转化子在96孔板上连续转接培养三次，每次培养1-2天，使菌体浓度渐趋一致，在分别点接于不同抗生素浓度的平板上（取1ul），浓度梯度可以设置为：0,0.25,0.5,1.0,2.0mg/ml。然后挑选在最高抗生素浓度平板上生长的菌落，培养后提取基因组利用AOX1通用引物或AOX1 3‘下游引物和α-factor组合引物或者是用目的基因特异性引物鉴定筛选到的转化子。
赞一下 回复此楼
6楼2013-10-09 08:24:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shyh1983 at 2013-10-09 08:24:40
高拷贝筛选就是利用抗生素进行梯度筛选。pPIC3.5K/pPIC9K等载体用G418梯度平板筛选，pPICZα系列的载体用博来霉素（Zeocin）筛选，根据楼主的描述所用抗生素会见光分解，那么猜测楼主所用的抗生素应该是Zeocin。方 ...

哦，了解了，谢谢
回复此楼
让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
7楼2013-10-09 09:32:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 静安jingan 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 12:13 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:41 by l0VvVHGBGRLv
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:19 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:18 by l0VvVHGBGRLv
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:10 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:39 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:17 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:58 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭