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静安jingan铁杆木虫 (职业作家)
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[求助]
酵母平板
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| 刚做了转化，用的是毕赤酵母，涂板后3天长出来的菌落so奇怪，以至于我就不淡定了，平板是倒置的，结果菌落是细丝状的垂直于平板生长，也是白色的，当然平板上也有那种很保守形态的酵母菌落，目前就是想知道这种到底是不是酵母，这个平板上的单克隆能不能用呢 |
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2楼2013-10-08 14:48:02
静安jingan
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3楼2013-10-08 14:54:12
4楼2013-10-08 17:57:20
cuicchao
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5楼2013-10-08 22:30:00
【答案】应助回帖
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静安jingan: 金币+7, ★★★很有帮助 2013-10-09 09:33:24
静安jingan: 金币+7, ★★★很有帮助 2013-10-09 09:33:24
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高拷贝筛选就是利用抗生素进行梯度筛选。pPIC3.5K/pPIC9K等载体用G418梯度平板筛选，pPICZα系列的载体用博来霉素（Zeocin）筛选，根据楼主的描述所用抗生素会见光分解，那么猜测楼主所用的抗生素应该是Zeocin。方法是先将所有的转化子在96孔板上连续转接培养三次，每次培养1-2天，使菌体浓度渐趋一致，在分别点接于不同抗生素浓度的平板上（取1ul），浓度梯度可以设置为：0,0.25,0.5,1.0,2.0mg/ml。然后挑选在最高抗生素浓度平板上生长的菌落，培养后提取基因组利用AOX1通用引物或AOX1 3‘下游引物和α-factor组合引物或者是用目的基因特异性引物鉴定筛选到的转化子。 |
6楼2013-10-09 08:24:40
静安jingan
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7楼2013-10-09 09:32:16
