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WB一抗二抗洗脱液洗脱后蛋白有耗损的问题怎么解决？
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| 最近做磷酸化的蛋白，测完磷酸化后要测总蛋白。用一抗二抗洗后，觉得蛋白有耗损。之前按照说明书做过一次，发现耗损比较明显。这次已经降低一半的一抗二抗洗脱时间。但是还是有耗损。想问问各位，做磷酸化后总蛋白都是怎么做到？如果保证总蛋白的量和之前相差不大呢？我把内参同时洗脱了孵的抗体，这样用磷酸化与内参的比值：总蛋白和洗脱后内参的比值可以吗？总蛋白的体积比磷酸化小，我用与内参的比消除这种误差可信吗？谢谢！ |
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2楼2013-10-06 21:05:33
3楼2013-10-08 21:23:01
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因为你所谓的比较都是相对的，你的磷酸化抗体或者总蛋白抗体的结合能力肯定是不同的。这就是为什么有的磷酸化的条带比总蛋白的还要强。所以你洗脱损失蛋白不会对你的比较有太大的影响。当然前提是你洗脱的比较均匀，不会有的地方洗脱掉了有的地方没有洗脱掉。 |
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herjasmine4楼2013-10-08 21:45:48
5楼2013-10-08 22:12:04
