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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 质谱分析 » 微生物代谢组在LC-MS上信号很少，不知道为什么。
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依儿咏迥

新虫 (初入文坛)

[求助] 微生物代谢组在LC-MS上信号很少，不知道为什么。

做微生物的代谢组学，采用甲醇：水（70:30）于负20度的条件下提取代谢组，并辅助以负80度30分钟，冰上4分钟，混匀，这样的三个循环促进细胞破裂。离心得到上清液后在真空浓缩里旋干，样品重构于水中，进样LC-MS，扫描范围50-1000，但没有什么信号，代谢组不是应该得到的谱图有很多峰的么？是不是旋干的过程这些小分子都挥发了呢，求解释啊。
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1楼 2013-10-05 17:42:51
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agilent

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
suruiqin: 金币+2, 辛苦了，感谢交流，欢迎常来~ 2013-10-09 09:43:58
依儿咏迥: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-09 11:04:12
首先，旋干的过程这些小分子应该不会挥发，可能以下因素会影响你的实验结果：
1、你的分析方法设置不合适，色谱柱、流动相梯度，质谱条件等；
2、提取条件可能不合适：
1）你用甲醇：水（70:30）提取，最后却是用水复溶，这个极性相差有点太大；
2）提取温度：负20度条件下，提取代谢物，溶解性应该不好
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2楼2013-10-08 17:09:41
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依儿咏迥

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by agilent at 2013-10-08 17:09:41
首先，旋干的过程这些小分子应该不会挥发，可能以下因素会影响你的实验结果：
1、你的分析方法设置不合适，色谱柱、流动相梯度，质谱条件等；
2、提取条件可能不合适：
1）你用甲醇：水（70:30）提取，最后却是用 ...

谢谢啊。分析方法影响应该不大吧，直接进样（无除盐）于C18，样品应该都上柱了，LTQ-Orbitrap分析。我看很多protocol上代谢物提取整个过程都处于极低的温度之下，那是不是可以采用提取试剂复溶提取物呢？
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3楼2013-10-09 11:13:32
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agilent

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
依儿咏迥: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-10 19:09:29
引用回帖:
3楼: Originally posted by 依儿咏迥 at 2013-10-09 11:13:32
谢谢啊。分析方法影响应该不大吧，直接进样（无除盐）于C18，样品应该都上柱了，LTQ-Orbitrap分析。我看很多protocol上代谢物提取整个过程都处于极低的温度之下，那是不是可以采用提取试剂复溶提取物呢？...

我不做微生物的，随便聊聊，不一定准确：
1、看下你的流动相梯度，是不是初始流动相太强，导致峰全在死时间出来了；
2、细胞破碎和酶的去活当然是在低温下操作，但是代谢物提取是不是可以温度稍高一点（如0度），水相比例高一点？
3、甲醇：水（70:30）提取溶剂对强极性的代谢物溶解性应该不是很好
4、细胞个数太少，复溶体积太大，进样体积太小，这些因素可能都会导致你最终什么峰。建议微生物用量加大点先试试。
5、试试其他细胞破碎的代谢物提取方法：如研磨、超声破碎等。
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依儿咏迥
4楼2013-10-10 10:07:22
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依儿咏迥

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by agilent at 2013-10-10 10:07:22
我不做微生物的，随便聊聊，不一定准确：
1、看下你的流动相梯度，是不是初始流动相太强，导致峰全在死时间出来了；
2、细胞破碎和酶的去活当然是在低温下操作，但是代谢物提取是不是可以温度稍高一点（如0度）， ...

嗯，很有道理。
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5楼2013-10-10 19:19:56
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JNVBNC

金虫 (小有名气)
做个衍生化吧～
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6楼2013-12-12 15:24:11
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fe123333

金虫 (小有名气)
没衍生化么？
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7楼2014-02-18 11:27:12
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