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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求解：纯化蛋白跑SDS-PAGE，没有条带
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715097730

铜虫 (小有名气)

[求助] 求解：纯化蛋白跑SDS-PAGE，没有条带 已有1人参与

各位大神，小妹现在遇到一大难题。
我有一株野生菌产我要的酶，发酵后我对粗酶液进行了盐析和透析，然后过了强阴离子柱，再把洗脱的蛋白冻干后用tris复溶，浓度大约300微克/毫升。之后就想做一个SDS-PAGE看看蛋白纯不纯，还有它的分子量。
分离胶和浓缩胶分别是12%和5%，但是就是没有条带，可是Marker是有条带的。不知道是什么原因，跪求各位能够解答！！！！！！！
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1楼 2013-10-04 19:17:51
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牛焕杰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

浓度太低了吧，你可以计算一下，300ug/ml，上样10ul样品，样品中只有3微克蛋白，这3微克还包括杂蛋白和你要的蛋白，考马斯亮蓝染色的灵敏度是0.1微克
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12楼2014-10-20 21:15:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-10-11 19:23:32
你通过什么方法检测你要的酶，测酶活吗？你可以分别监测纯化前的粗酶液、纯化过程中的各个组分的酶活，确定酶是否在纯化过程中丢失或者失活。
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2楼2013-10-04 22:21:41
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lmqml24

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
715097730: 金币+10 2013-10-11 15:47:03
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-10-11 19:23:42
本帖内容被屏蔽
3楼2013-10-04 23:49:43
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匿名

用户注销 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
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4楼2013-10-05 10:46:12
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