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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

[求助] 关于抑制类型的实验

最近做了判断抑制类型的实验,取了5个底物浓度,3个抑制剂浓度,最后根据吸光值做了1/V与1/S的拟合线,发现一个奇怪的现象,前两个抑制剂浓度下(分别是0uM和20uM)的线交与Y轴正向,但是第3个抑制剂浓度(40uM)确无法与前两条线交于一点,更可气的是其经常与X轴正向相交。有一次是40uM和20uM的线交于X轴负向,而20uM与0uM交于Y轴正向,前者表示是非竞争性抑制后者表示竞争性抑制,两者恰恰相反!

    这个实验我已经做了7次了,每次操作都很注意,三条线根本交不到一点,而且两两相交的位置相差很远。

求各位大神分享下做这类实验的经验。
关于抑制类型的实验
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-09-29 00:18:46
蓝三角的最低浓度误差太大了,建议删除试试。估计速度太低,倒数太大了
2楼2013-09-28 13:46:12
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zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-09-29 00:18:54
二楼的意思是有可能交叉于y轴
3楼2013-09-28 22:17:47
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)


137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-09-29 00:19:01
引用回帖:
2楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-28 13:46:12
蓝三角的最低浓度误差太大了,建议删除试试。估计速度太低,倒数太大了

去了那个点后,蓝色和红色的线就会交于y轴负方向了,变成非竞争性抑制了
4楼2013-09-28 22:49:54
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
拉风蜗牛王: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-09-29 16:46:55
引用回帖:
4楼: Originally posted by 拉风蜗牛王 at 2013-09-28 22:49:54
去了那个点后,蓝色和红色的线就会交于y轴负方向了,变成非竞争性抑制了...

建议再多选几个抑制剂浓度试试10uM和30uM试试。看看会不会交于y轴,反竞争要求所有线交于x轴,但0uM和20uM不可能交于x轴。而且蓝三角的拟合明显较差,不能作为主要判断依据。而0uM和20uM的数据更好些,可靠性也高些。
5楼2013-09-29 08:16:33
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hl16010921

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-29 08:16:33
建议再多选几个抑制剂浓度试试10uM和30uM试试。看看会不会交于y轴,反竞争要求所有线交于x轴,但0uM和20uM不可能交于x轴。而且蓝三角的拟合明显较差,不能作为主要判断依据。而0uM和20uM的数据更好些,可靠性也高些 ...

更正:非竞争交于X轴。。一不小心打错了。
6楼2013-09-29 08:18:21
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拉风蜗牛王

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-29 08:18:21
更正:非竞争交于X轴。。一不小心打错了。...

好的,谢谢!但是我这个40uM的做了7次了,为什么每次都不行呢,总不可能每次都因为偶然因素0uM和20uM做得好,而40uM做得不好啊!我感觉肯定有什么特定的问题存在。
7楼2013-09-29 16:46:25
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