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godloveplum

金虫 (小有名气)

[求助] 提取RNA时,忘了最后一步用75%的无水乙醇清洗

今天用Trizol提取RNA时,忘了做最后一步加入75%的无水乙醇,然后离心。做到加异丙醇离心后,就直接将异丙醇倒掉晾干,加无酶水溶解了。然后测OD260/OD280,比值还是比较好的2.06,RNA的浓度测出来还是比较可以的有40ng/ul左右,因为我就用了两根触角,反转录后测ssDNA的OD260/OD280分别为1.55,1.64,浓度为400ng/ul左右。求前辈们指点,我这结果可靠不,cDNA能否用于后续试验?Trizol提rna忘了用75%的无水乙醇清洗有何影响?不甚感激
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Nothingisimpossibleforawillingheart!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-09-27 08:45:25
godloveplum: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-01 16:44:10
可能样品里盐浓度高一些,这并不会对你A260/280造成什么影响,但可能会影响后续实验。
2楼2013-09-27 00:11:24
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rodickholm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
godloveplum: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-10-01 16:44:34
因为异丙醇沉淀的时候要加盐来提高RNA的沉淀效率,异丙醇会使以前几步溶液中的盐(比如trizon的水相中的)和沉淀时加入的醋酸铵一起沉淀下来,需要用酒精清洗两遍把这些盐溶解掉,否则可能会影响以后的反应.


另外,提触角,和我当年一样
3楼2013-09-27 21:02:04
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