| 查看: 3765 | 回复: 12 | ||
[求助]
高手请进--金黄色葡萄球菌的electroporation问题
|
|
各位虫友们， 目前这个问题已经困惑我了将近半年的时间，真心的恳请虫友们帮帮我。 为了做一个临床株的mutant strain， 我需要将一个重组的plasmid通过electroporation导入到这个金黄色葡萄球菌中。已经几乎确定过了所有步骤没有弄错--先酶切质粒和target DNA--进行ligation之后--tansformation到E.coli(DH5a)--electroporation到RN4220--细菌正常长出--再提质粒--electroporation到这个临床株的competent cells-------------什么也没长出来（大概做了几十次，从检查competent cells到重组plasmid测序及PCR确认等等）！！！ 真心着急，pasmid进不去，就做不了mutant strain，实验就不能继续往下进行。希望虫友们能给出一些指点，建议，和一些相关资料能供我学习。在此，先谢过了！！   |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有214人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 金黄色葡萄球菌的等电点是多少？
已经有4人回复
- 金黄色葡萄球菌的11种血清型分别是什么
已经有4人回复
- 关于金黄色葡萄球菌平板菌落计数问题
已经有22人回复
- 金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的培养
已经有9人回复
- 金黄色葡萄球菌计数
已经有6人回复
- 求金黄色葡萄球菌的生长曲线！！！！！
已经有4人回复
- 金黄色葡萄球菌的LB平板上的菌落形态
已经有14人回复
- 金黄色葡萄球菌，大肠杆菌，枯草芽孢杆菌培养时光照有没有影响
已经有7人回复
- 金黄色葡萄球菌质控菌株
已经有12人回复
- 嗜盐菌、厌氧菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、高渗酵母菌、乳酸菌
已经有5人回复
- 急求行家鉴定菌落是不是金黄色葡萄球菌、沙门氏菌
已经有8人回复
- 金黄色葡萄球菌检验（国家标准） GB4789.10-2010
已经有7人回复
- 金黄色葡萄球菌马尿酸钠水解实验
已经有4人回复
- 【求助/交流】到哪里能买到金黄色葡萄球菌蛋白A?
已经有4人回复
- 【求助/交流】金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌怎么保存？
已经有13人回复
- 【求助/交流】金黄色葡萄球菌的培养
已经有15人回复
- 【求助/交流】白色念珠菌和金黄色葡萄球菌怎么保存
已经有8人回复
2楼2013-09-10 16:44:25
3楼2013-09-10 16:46:07
4楼2013-09-13 14:21:20
5楼2013-09-13 14:23:45
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
myprayer: 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-10 09:57:53
yuliansheng: 金币+5, ★有帮助, 我知道你说的这些方法，我也是先电转质粒到RN4220，然后再提质粒，电转到我所研究的临床aureus株。试了好多好多次，包括电转条件，加入质粒的量等等，都没能成功导入质粒。你说的那篇文章我也读过，也试过里面所说的方法，也没能成功。（你所说的那篇文章是Transforming the Untransformable: Application of Direct Transformation To Manipulate Genetically Staphylococcus aureusand Staphylococcus epidermidis） 不过还是很感谢你。还有其他的方法或关于这方便的信息吗？ 2013-10-28 19:33:49
myprayer: 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-10 09:57:53
yuliansheng: 金币+5, ★有帮助, 我知道你说的这些方法，我也是先电转质粒到RN4220，然后再提质粒，电转到我所研究的临床aureus株。试了好多好多次，包括电转条件，加入质粒的量等等，都没能成功导入质粒。你说的那篇文章我也读过，也试过里面所说的方法，也没能成功。（你所说的那篇文章是Transforming the Untransformable: Application of Direct Transformation To Manipulate Genetically Staphylococcus aureusand Staphylococcus epidermidis） 不过还是很感谢你。还有其他的方法或关于这方便的信息吗？ 2013-10-28 19:33:49
|
你直接用质粒 电转 RN4220 时，可以加大质粒用量，可以加到5ug，提高电转效率。 另外，也不可以试试不借助RN4220，我不知道，你最终要把质粒放在哪个菌株。 在你做转化时，转入了DH5a, 这一步，可以用 E.coli DC10B，这是个为转化S.aureus设计的菌株，E.coli DH10B的突变体。 我是直接转进 DC10B, 然后提取质粒 鉴定， 电转 S.aureus Newman，中间不经过RN4220，还挺容易的。 你可以找下 E.coli DC10B的文献 |
6楼2013-10-10 06:09:18
tanxiaojuan
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2133.2
- 散金: 792
- 红花: 8
- 帖子: 499
- 在线: 764.2小时
- 虫号: 1222701
- 注册: 2011-03-06
- 专业: 微生物学
7楼2013-10-24 09:47:20
8楼2013-12-30 10:32:39
9楼2015-09-15 20:28:37
10楼2015-12-18 11:09:26
