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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 高手请进--金黄色葡萄球菌的electroporation问题
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

[求助] 高手请进--金黄色葡萄球菌的electroporation问题

各位虫友们，
      目前这个问题已经困惑我了将近半年的时间，真心的恳请虫友们帮帮我。
       为了做一个临床株的mutant strain， 我需要将一个重组的plasmid通过electroporation导入到这个金黄色葡萄球菌中。已经几乎确定过了所有步骤没有弄错--先酶切质粒和target DNA--进行ligation之后--tansformation到E.coli(DH5a)--electroporation到RN4220--细菌正常长出--再提质粒--electroporation到这个临床株的competent cells-------------什么也没长出来（大概做了几十次，从检查competent cells到重组plasmid测序及PCR确认等等）！！！
     真心着急，pasmid进不去，就做不了mutant strain，实验就不能继续往下进行。希望虫友们能给出一些指点，建议，和一些相关资料能供我学习。在此，先谢过了！！
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学习....
1楼 2013-09-09 21:30:51
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yuliansheng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 妳口妳口 at 2013-09-10 16:44:25
实验急需RN4220菌株，没买到，请问楼主从哪里购买的？是否能够馈赠我一份，或者卖给我一份，十分感谢

这位仁兄，不好意思，我在日本留学，要是在国内的话就送你一份了。
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学习....
4楼2013-09-13 14:21:20
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妳口妳口

新虫 (小有名气)
实验急需RN4220菌株，没买到，请问楼主从哪里购买的？是否能够馈赠我一份，或者卖给我一份，十分感谢
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2楼2013-09-10 16:44:25
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妳口妳口

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-10 09:57:43
楼主你的感受态会不会有问题？革兰氏阳性菌的感受态做法不一样的
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3楼2013-09-10 16:46:07
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yuliansheng

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 妳口妳口 at 2013-09-10 16:46:07
楼主你的感受态会不会有问题？革兰氏阳性菌的感受态做法不一样的

我用的是专门的金黄色葡萄球菌的感受态细胞的制作方法，这应该不会有问题。但如果有更好的制作感受态细胞的方法的话，我倒是想借鉴一下。
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5楼2013-09-13 14:23:45
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