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yuliansheng

金虫 (小有名气)

[求助] 高手请进--金黄色葡萄球菌的electroporation问题

各位虫友们,
      目前这个问题已经困惑我了将近半年的时间,真心的恳请虫友们帮帮我。
       为了做一个临床株的mutant strain, 我需要将一个重组的plasmid通过electroporation导入到这个金黄色葡萄球菌中。已经几乎确定过了所有步骤没有弄错--先酶切质粒和target DNA--进行ligation之后--tansformation到E.coli(DH5a)--electroporation到RN4220--细菌正常长出--再提质粒--electroporation到这个临床株的competent cells-------------什么也没长出来(大概做了几十次,从检查competent cells到重组plasmid测序及PCR确认等等)!!!
     真心着急,pasmid进不去,就做不了mutant strain,实验就不能继续往下进行。希望虫友们能给出一些指点,建议,和一些相关资料能供我学习。在此,先谢过了!!
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 妳口妳口 at 2013-09-10 16:44:25
实验急需RN4220菌株,没买到,请问楼主从哪里购买的?是否能够馈赠我一份,或者卖给我一份,十分感谢

这位仁兄,不好意思,我在日本留学,要是在国内的话就送你一份了。
学习....
4楼2013-09-13 14:21:20
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妳口妳口

新虫 (小有名气)

实验急需RN4220菌株,没买到,请问楼主从哪里购买的?是否能够馈赠我一份,或者卖给我一份,十分感谢
2楼2013-09-10 16:44:25
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妳口妳口

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-10 09:57:43
楼主你的感受态会不会有问题?革兰氏阳性菌的感受态做法不一样的
3楼2013-09-10 16:46:07
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yuliansheng

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 妳口妳口 at 2013-09-10 16:46:07
楼主你的感受态会不会有问题?革兰氏阳性菌的感受态做法不一样的

我用的是专门的金黄色葡萄球菌的感受态细胞的制作方法,这应该不会有问题。但如果有更好的制作感受态细胞的方法的话,我倒是想借鉴一下。
学习....
5楼2013-09-13 14:23:45
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