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风吹我已散

木虫 (正式写手)

[求助] 新手好多问题

导师好严格啊,都不敢问他,所以自己很多问题。
1. PMD-19T 是表达载体么?
2. 我克隆了一个酶基因,然后转到大肠杆菌体内,老师让分析基因功能;然后我查阅文献,觉得测酶活比较好,然后导师说你做体内酶活吧。可我查的文献都是做体外酶活的。大肠杆菌体内酶活怎么做啊?加底物测浓度变化?可是万一大肠杆菌对这个底物吸收低怎么办?万一底物加进去会影响大肠杆菌的正常生长怎么办?这个基因是催化乙酰辅酶A和乙酰乙酰辅酶A合成HMGS-COA的。
请各位帮帮忙,多谢!
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风吹我已散

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 2008101111 at 2013-09-06 21:47:36
首先PMD-19T只是TA克隆载体,目的是从基因组中分离出你的目的基因片段,其次,体内酶活比较难做,也很复杂,你这个酶完全可以做体外检测的

谢谢你,怎么做体外酶活啊?提取总蛋白么?还是能纯化我这个蛋白啊?
6楼2013-09-07 09:52:56
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查看全部 7 个回答

sxxuan

金虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
风吹我已散: 金币+1 2013-09-06 11:30:22
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助! 2013-09-06 11:47:10
. PMD-19T不 是表达载体
没做过酶活不能回答你的问题
新手要提高就是不断地看书看文献。像你的第二个问题,其实应该就先问清楚你导师,万一你问了这里的人答案和你导师的不一样,那就不好了
你的日子如何,你的力量也必如何!
2楼2013-09-06 11:17:58
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xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是测反应体系某个特定波长的吸收把,酶活检测时一般都是用紫外分光光度计。
问老板或者师姐师兄啊,怕啥,你越不问做错了他越生气。
3楼2013-09-06 16:28:07
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风吹我已散

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-09-06 16:28:07
应该是测反应体系某个特定波长的吸收把,酶活检测时一般都是用紫外分光光度计。
问老板或者师姐师兄啊,怕啥,你越不问做错了他越生气。

是的,但是,是不是要纯化蛋白呢?还是把提出来的蛋白质都加进去?
4楼2013-09-06 20:27:05
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