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风吹我已散

木虫 (正式写手)

[求助] 新手好多问题

导师好严格啊，都不敢问他，所以自己很多问题。
1. PMD-19T 是表达载体么？
2. 我克隆了一个酶基因，然后转到大肠杆菌体内，老师让分析基因功能；然后我查阅文献，觉得测酶活比较好，然后导师说你做体内酶活吧。可我查的文献都是做体外酶活的。大肠杆菌体内酶活怎么做啊？加底物测浓度变化？可是万一大肠杆菌对这个底物吸收低怎么办？万一底物加进去会影响大肠杆菌的正常生长怎么办？这个基因是催化乙酰辅酶A和乙酰乙酰辅酶A合成HMGS-COA的。
请各位帮帮忙，多谢！
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1楼 2013-09-06 10:01:12
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
风吹我已散: 金币+1 2013-09-06 11:30:22
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-09-06 11:47:10
. PMD-19T不 是表达载体
没做过酶活不能回答你的问题
新手要提高就是不断地看书看文献。像你的第二个问题，其实应该就先问清楚你导师，万一你问了这里的人答案和你导师的不一样，那就不好了
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你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2013-09-06 11:17:58
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xiaopeiliang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是测反应体系某个特定波长的吸收把，酶活检测时一般都是用紫外分光光度计。
问老板或者师姐师兄啊，怕啥，你越不问做错了他越生气。
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3楼2013-09-06 16:28:07
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风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaopeiliang at 2013-09-06 16:28:07
应该是测反应体系某个特定波长的吸收把，酶活检测时一般都是用紫外分光光度计。
问老板或者师姐师兄啊，怕啥，你越不问做错了他越生气。

是的，但是，是不是要纯化蛋白呢？还是把提出来的蛋白质都加进去？
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4楼2013-09-06 20:27:05
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
风吹我已散: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-09-07 09:51:36
首先PMD-19T只是TA克隆载体，目的是从基因组中分离出你的目的基因片段，其次，体内酶活比较难做，也很复杂，你这个酶完全可以做体外检测的
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自主创业者，捣腾生物试剂
5楼2013-09-06 21:47:36
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风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2008101111 at 2013-09-06 21:47:36
首先PMD-19T只是TA克隆载体，目的是从基因组中分离出你的目的基因片段，其次，体内酶活比较难做，也很复杂，你这个酶完全可以做体外检测的

谢谢你，怎么做体外酶活啊？提取总蛋白么？还是能纯化我这个蛋白啊？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-09-07 09:52:56
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 风吹我已散 at 2013-09-07 09:52:56
谢谢你，怎么做体外酶活啊？提取总蛋白么？还是能纯化我这个蛋白啊？...

你就粗提一下，做个对照试验，检测一下酶活能有多少变化就好了
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自主创业者，捣腾生物试剂
7楼2013-09-07 09:59:30
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