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anni8953

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS跑蛋白新手求助

我跑的条带不是很清晰 背景颜色较深
条带集中在胶的上半部分
用的是12%的分离胶 5%浓缩胶
70V转120V
1.5mm 15teech的梳子
上样量 30μg 15ml
求解
SDS跑蛋白新手求助
2013-9-4-1.png
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

更正:
聚丙烯酰胺凝胶浓度/%            蛋白质分离范围/kd
5%                                                36—200
7.5 %                                             24—200
10 %                                                14—200
12.5  %                                           14—100
15 %                                                14—60
浓缩胶浓度低;分离胶浓度高于浓缩胶,一般不小于5%。2KD的蛋白质必须要用Tricine胶系统,上面说的改进对于分子量低于3KD的蛋白质的电泳没有用,但是对于高于3KD的蛋白质的电泳有用。
15楼2013-09-08 17:32:01
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anni8953

新虫 (初入文坛)

浓缩胶需要染色脱色吗?
我染色时摇会把浓缩胶摇下来
而且感觉浓缩胶上有条带

还有marker有拖尾情况怎么解决?
2楼2013-09-04 16:53:33
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tujuo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-09-06 07:50:40
anni8953: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢啦 分离胶浓度下降之后就成功了 2013-10-14 18:58:33
上样太多,分离胶浓度太高~~你这个9%的就可以了。而且看你跑的这个,蛋白提的好像有问题。貌似是核酸有点多~
如果能让自己不在等待中苍老,又何尝不想活得洒脱。。。
3楼2013-09-04 22:09:20
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tujuo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

marker有拖尾估计是跑的时间太长了(因为浓缩胶浓度太高)下面小分子量的蛋白扩散了
如果能让自己不在等待中苍老,又何尝不想活得洒脱。。。
4楼2013-09-04 22:11:22
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